微生物的培养和应用.docVIP

专题二 微生物的培育和应用 课题1微生物的实验室培育 一、基础知识： （一）培育基 1．培育基是人们依照微生物对营养物质的需求不一样而配制出供其生长生殖的营养基质， 培育基的 种类包含固体培育基和液体培育基等。 2．琼脂是从红藻中提取的多糖，在配制培育基顶用作为凝结剂。 【开辟视线 1】培育基的种类（记忆）及其应用 分类标准 培育基种类 配制特色 主要应用 固体培育基 加入琼脂许多 菌种分别、判定、计数 物理性质 半固体培育基 加入琼脂较少 菌种保留 液体培育基 不加入琼脂 工业生产的连续培育 化学构成 合成培育基 由已知化学成分派制而成，培育基成分明确 菌种分类、判定 天然培育基 由天然成分派制而成，培育基成分不明确 用于工业生产降低成本 目的用途 鉴识培育基 增添某种指示剂或化学药剂 菌种的鉴识 选择培育基 增添（或缺乏）某种化学成分 菌种的分别 3．各样培育基的用途 培育基名称 应用 培育基名称 应用 牛肉膏蛋白胨培育基 培育细菌 查氏培育基 培育霉菌 营养琼脂培育基 培育细菌 MY培育基 霉菌和酵母菌传代收藏 麦芽汁琼脂培育基 培育酵母菌 尹红美蓝培育基 检测水中大肠杆菌含量 马铃薯琼脂培育基 培育真菌 MS培育基 用于植物组织培育 4．培育基的化学成分包含水、无机盐、碳源、氮源四类营养成分。别的，培育基还要知足微生物生长的pH、特别营养物质和氧气等要求。 【开辟视线2】有机营养成分及其作用 碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等含碳有机物，构成微生物的构造物质和分泌物，并供给能量。氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。生长因子：某些微生物正常生长代谢中一定从培育基中汲取的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、维生素等。 此中，含有C、H、O、N的化合物既能够作为碳源，又能够作为氮源，如氨基酸等。 【思虑1】牛肉膏和蛋白胨的作用是答：主要为微生物供给糖、维生素和有机氮等营养物质。 【思虑2】培育乳酸杆菌、霉菌、和细菌时各有什么特别要求答：培育乳酸菌时需要增添维生素； 培育霉菌时需要将培育基pH调理为酸性；培育细菌时需要将pH调理为中性或微碱性。（二）无菌技术 1．获取纯净培育物的重点是防备外来杂菌的入侵。 2．无菌技术包含：对实验操作空间、操作者的穿着和手进行洁净和消毒；将培育器皿、接种器具和培育基等器具进行灭菌；为防止四周微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰邻近旁进行；防止已灭菌办理的资料器具与四周物件相接触。 3．比较消毒和灭菌 比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数目芽孢和孢子可否被消灭  消毒较为平和部分生活状态的微生物不可以 灭菌激烈所有微生物能 【思虑3】无菌技术除了防备培育物被污染外，还拥有什么目的答：防备感染实验操作者。 （三）实验室常用的消毒和灭菌方法 1．消毒方法：生活常常用到的是煮沸消毒法；对一些不耐高温的液体则用巴氏消毒法；对接种室、 接种箱或超净工作台第一喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液，而后使用紫外线进行物理消毒；实验者的双手使用酒精进行消毒；饮水水源用氯气进行消毒；肌肉注射时所用的皮肤消毒剂有酒精、碘酒； 皮肤擦伤后所用的消毒剂有结晶紫、红汞、H2O2等。 2．灭菌方法：接种环、接种针、试管口等用灼烧灭菌法； 玻璃器皿、金属器具等用干热灭菌法，所用器材是干热灭菌箱； 培育基、无菌水等用高压蒸汽灭菌法，所用器材是高压蒸汽灭菌锅； 3．利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物件不可以太挤，目的是防止阻碍热空气流通。 4．高压蒸汽灭菌法：物件装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要第一翻开排气阀，煮沸并清除锅内的冷 空气，目的是有益于锅内温度高升；随后封闭排气阀持续加热，气压升至100kPa，温度为121℃， 并保持15～30min；切断热源使温度自然降温，气压务必降至零时翻开锅盖，其目的是防备容器 中的液体暴沸。 二、实验操作（大肠杆菌的纯化培育） （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培育基 1．计算：依据牛肉膏蛋白胨培育基配方的比率，计算100mL培育基各成分用量。 2．称量：牛肉膏较粘稠，可用玻棒挑取，同称量纸一起称量。称取牛肉膏和蛋白胨时动作要快速，目的是防备牛肉膏汲取空气中水分。 3．熔解：加水加热融化牛肉膏与称量纸→拿出称量纸→加入蛋白胨和氯化钠持续加热→加入 →用蒸馏水定容到100mL（整个过程不停用玻棒搅拌，目的是防备琼脂糊底而致使烧杯破碎）。4．灭菌：将配制好的培育基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用高压蒸汽灭菌锅灭菌；所用培育皿用报纸包扎后用干热灭菌箱灭菌。 5．倒平板：待培育基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰邻近操作进行。 其过程是： ①在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；②右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口快速经过分焰；③左手将培育皿翻开一条空隙，右手将培育基倒入培育皿，马上盖上皿盖