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还原糖、脂肪和蛋白质的鉴定实验
1、熟悉实验的一般过程
(1)了解实验原理
(2)熟悉实验材料、试剂和器材
(3)了解实验的操作过程
实验操作的原则:编号原则、对照原则、单一变量原则、等量原则。
(4)实验结果的观察(根据实验现象得出)
(5)实验结论( 即实验原理)
2.鉴定生物组织中糖类
问题导学:
1.鉴定淀粉的试剂?产生的颜色反应?
2.鉴定还原糖的试剂?操作方法?颜色反应?
(1)实验原理
糖类
淀粉+碘→蓝色
还原糖+斐林试剂
50~65℃水浴加热
约2 min
砖红色沉淀
2.鉴定生物组织中糖类
(2)实验的材料、试剂
蔗糖、淀粉、唾液淀粉酶、稀碘液、斐林试剂
(3)实验的一般步骤
鉴定淀粉
类 别
糖 类
碘液/滴
颜色反应
A 管
B 管
蔗 糖
淀 粉
等 量
等 量
无颜色变化
紫色变成蓝色
还原糖的检测和观察(方法一)
选材:含糖量较高、白色或近于白色的植物组织
结论:组织样液中有可溶性还原糖
(3)实验的一般步骤
(3)实验的一般步骤
鉴定还原糖(方法二)
类 别
糖 类
斐林试剂/ml
颜色反应
C 管
D 管
蔗糖+清水
淀粉+清水
无颜色变化
2ml
2ml
2ml
E 管
淀粉+淀粉酶
无颜色变化
砖红色沉淀
还原糖实验讨论:
1、选择富含还原糖的白色或浅色的植物组织。
举例说明?
在还原糖的鉴定过程中,能否选用西瓜、甘蔗、甜菜作
为实验材料,为什么?
2、试验中体现哪些原则?
3、斐林试剂的组成及使用方法?
4、还原糖鉴定中颜色的变化?
斐林试剂不稳定,应现用现配
蓝色到棕色到砖红色沉淀
例1:下列关于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖水解作用实验原理的叙述中,不正确的是A.淀粉和蔗糖都是非还原糖,在加热条件下与斐林试剂作用不产生砖红色沉淀B.淀粉能在淀粉酶的催化下水解成还原糖C.蔗糖能在淀粉酶作用下水解成还原性葡萄糖和果糖D.淀粉酶能否催化淀粉和蔗糖的水解,是通过有无还原糖特定的颜色反应来证明的
例2.下列关于斐林试剂的使用方法及现象中,正确的是
A.先向组织样液中加入甲液,混合均匀后再加入乙液
B.先将甲液与乙液混合均匀后,放置若干天再使用
C.斐林试剂与双缩脲试剂中的硫酸铜浓度不同,使用方法相同
D.将斐林试剂与组织样液混合均匀,水浴加热后出现砖红色沉淀
3.鉴定生物组织中脂肪
问题导学:
1.脂肪鉴定的原理?
2.含有脂肪的生物组织?
3.鉴定脂肪时,所用酒精的作用?
(1)实验原理
脂肪+苏丹Ⅲ染液→橘黄色
脂肪+苏丹Ⅳ染液→红色
3.鉴定生物组织中脂肪
(2)实验材料、试剂
洋葱根尖、核桃种子、苏丹Ⅲ染液、苏丹Ⅳ染液、
50%酒精
(3)脂肪的检测和鉴定
方法一:花生种子匀浆+3滴苏丹Ⅲ染液→橘黄色
方法二:
取材:花生种子(浸泡),将子叶削成薄片
结论:花生种子中有脂肪存在
脂肪的鉴定中,实验用的花生种子需提前浸泡3~4 h, 浸泡时间太短,不易切片;浸泡时间太长,则组织太软,切下的薄片不易成形。
例3、用苏丹III染液对脂肪组织进行染色时,可用来冲洗浮色的药品是
A、HCl B、H2O
C、50%的酒精 D、无水酒精
例4、下列哪个实验用到显微镜
A、可溶性还原糖的鉴定 B、蛋白质的鉴定 C、脂肪的鉴定 D、淀粉的鉴定
问题导学:1.鉴定蛋白质的实验原理
2.蛋白质试剂的配制方法
3.双缩脲试剂与斐林试剂的区别
4.鉴定生物组织中蛋白质
(1)实验原理
蛋白质+双缩脲试剂→紫色
4.鉴定生物组织中蛋白质
(2)实验材料、试剂
鸡蛋清、牛奶、双缩脲试剂
(3)蛋白质的检测和观察
选材与制备:鲜肝提取液或黄豆浆滤液
结论:组织样液中存在蛋白质
在蛋白质的鉴定实验中,如果用蛋清稀释液作为实验材料,一定要稀释到一定程度,否则,与双缩脲试剂 发生反应后会粘在试管的内壁上,使反应不彻底,试 管也不易洗刷干净.
斐林试剂与双缩脲试剂的比较
斐林试剂
双缩脲试剂
鉴定成分
还原糖
蛋白质
鉴定原理
还原糖中的醛基(—CHO)在加热条件下能将Cu(OH)2中的Cu2+还原成Cu+,从而生成砖红色的Cu2O沉淀
双缩脲(H2NOC—NH—CONH2)在碱性溶液中能与Cu2+结合生成紫色络合物,蛋白质分子中含有与双缩脲结构相似的肽键
斐林试剂
双缩脲试剂
试剂浓度
甲液:质量浓度为0.1g/mL的NaOH溶液;
乙液:质量浓度为0.05g/mL的CuSO4溶液
A液:质量浓度为0.1g/mL的NaOH溶液;
B液:质量浓度
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