生物样品前处理制备分离.pptVIP

透析膜的处理： 1.从成卷的透析膜中剪下适用的长度（一般20-30厘米）。 2.用过量的10mmol/L碳酸氢钠湿润透析膜并煮沸几分钟。 3.在10mmol/LNa2EDTA中煮沸几分钟，重复一次。也可在稍加搅拌下浸泡30分钟替代煮沸。 4.用蒸馏水或超纯水清洗数次。 5.置20%-50%乙醇溶液中，储存于4℃，以防能分解纤维素的微生物生长。 第三十页，共七十八页。 ?注意事項： *操作时必需戴手套* 1. 取出透析袋要先用蒸餾水清洗乾淨，綁透析袋前要先試裝蒸餾水，看透析袋有沒有蛀孔，會不會有水噴出。 綁透析袋不要太用力拉扯，否則透析袋可能會裂。 2. 一般透析至少要 3 h，至少要換兩次透析液 (100 至 1000 倍樣本體積) 才能完全。 3. 注意離心濃縮管的離心轉速不能太快，否則薄膜很容易破裂。 4. 每次離心濃縮後，暫時不要丟掉外濾液 (filtrate)，收集起來以防薄膜破裂流失。 第三十一页，共七十八页。 5. 生物样品的浓缩 概念：从低浓度的溶液中除去水或溶剂使之变为高浓度溶液的过程。生物样品的制备，提取后往往先要进行浓缩，然后再进行干燥和结晶。 方法： 1.利用亲水凝胶吸收溶液中的水分而得到浓溶液。 2.超滤法利用半透膜截流大分子，适于浓缩生物大分子。 3.离子交换法与吸附法是稀溶液通过离子交换柱或吸附柱，溶质被吸附后，再用少量液体洗脱、分部收集能使所需要物质的浓度提高几倍以至几十倍。 4.还有冷冻融化、加沉淀剂、溶剂萃取、亲和层析等方法也能达到浓缩的目的。我们只介绍蒸发浓缩。 第三十二页，共七十八页。 5.1 蒸发 概念：溶液表面的水和溶剂分子获得的动能超过溶液内分子间的吸引力以后，脱离液面进入空间的过程。 常用方法： 1.常压蒸发 2.减压蒸发 第三十三页，共七十八页。 5.1.1 常压蒸发及常压蒸发装置 原理：在常压下加热使溶剂挥发，达到浓缩目的。 方法简单，适于浓缩耐热样品。 所用装置为蒸发皿和玻璃蒸馏器。 第三十四页，共七十八页。 5.1.2 减压蒸发及减压蒸发装置 原理：通过减压使液面压力降低，而压力降低，沸点降低，蒸发速度加快。 应用：适于浓缩不耐热的样品。、 第三十五页，共七十八页。 常用减压蒸发装置 1.减压加温蒸发器：在常压蒸发用蒸馏器上加真空泵。 第三十六页，共七十八页。 常用减压蒸发装置 2.旋转蒸发器：又称为旋转浓缩仪。它采用了旋转烧瓶，烧瓶由电机驱动缓慢旋转，液体在烧瓶内壁展开成膜溶剂得以迅速扩散蒸发，可防止溶液爆沸，蒸发率成倍提高。 第三十七页，共七十八页。 6. 生物样品的干燥及器材 干燥：除掉潮湿的固体、膏状物、浓缩液和液体样品中的水分及溶剂的过程。 目的：提高样品的稳定性，以供进一步的保存分析。 方法： 1.常压吸收干燥 2.真空干燥 3.冷冻干燥 第三十八页，共七十八页。 6.1 常压吸收干燥器材 常压干燥是指在密闭的空间或干燥器内使用干燥剂进行的干燥。 第三十九页，共七十八页。 常用干燥剂及性能： 1.无水硫酸钠：中性，价廉，吸水量大，但作用慢，效力差。 2.无水硫酸镁：中性，效力中等，作用快，吸水量大。 3.无水硫酸钙：作用快，效率高。与有机物不发生反应，不溶于 有机溶剂，缺点是吸水量小，可用于二次干燥。 4.固体氢氧化钾（或钠）：可吸收水、氨和胺类。钾比钠的吸水 能力大60-80倍。 5.五氧化二磷：吸水、效力最高、作用非常快，但价格较贵。 6.氧化钙：即生石灰，碱性，吸水后成为不溶的氢氧化物，价廉 7.分子筛：泛指具有均一微孔而能选择的吸附直径小于其孔径的分子的那些吸附剂。如沸石分子筛，碳分子筛等，其中常用沸石分子筛。 第四十页，共七十八页。 常用干燥剂及其作用 干 燥 剂 吸收的溶剂或其他杂质 无水Na2SO4、MgSO4 、 CaSO4 、硅胶 水 CaO 水、乙酸、氯化氢 KOH、NaOH 水、乙酸、氯化氢、酚、醇 无水CaCl2、P2O5 水、醇 石蜡刨片 醇、醚、石油醚、苯、甲苯、氯仿、四氯化碳 第四十一页，共七十八页。 6.2 真空干燥 原理：在抽真空的容器中压力降低则溶剂的沸点也就降低，蒸发速度加快。 适用于干燥不耐热的样品。 实验室内常可利用的组合器材有： 真空干燥器（箱）、冷凝管及真空泵。 第四十二页，共七十八页。 真空干燥器（箱） 1.市售有玻璃和特殊塑料两种。 2.真空度不宜过高.以上盖推不动即可. 3.使用新的干燥器前，一般先须作耐压试验。 4.处理危险或有毒样品时，干燥器外应罩铁