研究生入学考试酶学及酶工程课.ppt

研究生入学考试酶学及酶工程课;第三章 酶的结构与功能;2. 荧光光谱 ;;荧光分析法;荧光强度公式;蛋白质的内源荧光 ;;蛋白质的外源荧光;常用荧光探针 ;荧光标记探测构象变化;荧光分析（续）;能量转移;转移效率和两基团距离相关，可以测定分子（基团）间距离。;3. 园二色谱（CD谱）;右旋园偏振光的合成;振幅（强度）不同，频率相同的左右偏振光合成椭圆偏振光，椭园度的正切为椭园短轴和长轴之比。;园二色性的关系式;园二色谱与二级结构;;二级结构计算;蛋白质的构象变化造成二级结构改变时，园二色谱发生变化。从而可以测定去折叠（变性）和重折叠（复性）的状态和变化;4. 红外光谱(RTIR);酰胺基团红外光谱;水溶液中酰胺I带特征频率指认;重水中酰胺I带特征频率指认;去卷积谱和二阶导数谱;红外光谱:去卷积谱曲线拟合;红外光谱:二级结构指认例;第三章 酶的结构与功能;1. 蛋白质折叠机制研究;折叠理论;变性复性研究;2.研究实例;动物脂肪酸合酶是一个典型多功能复合酶;荧光分析表现脂肪酸合酶的胍变性存在两阶段结构变化过程。;紫外差光谱，园二色谱研究也表现了两个构象变化阶段。 但在整体构象发生变化之前，该酶已不可逆失活。;巯基暴露测定;巯基暴露实验表现该酶三级结构打开和其它方法测定的第一阶段整体构象变化同步发生。;不可逆失活测定表明，该酶全反应的失活先于单独功能结构域的失活。;在很低胍浓度下该酶的全反应活性和两个单独还原中心活性同步被可逆抑制，且先于不可逆抑制的发生。;;;讨论;讨论（续）;讨论（续）;讨论（续）;;课外练习（记分）研究生入学考试酶学及酶工程课;第三章 酶的结构与功能;2. 荧光光谱 ;;荧光分析法;荧光强度公式;蛋白质的内源荧光 ;;蛋白质的外源荧光;常用荧光探针 ;荧光标记探测构象变化;荧光分析（续）;能量转移;转移效率和两基团距离相关，可以测定分子（基团）间距离。;3. 园二色谱（CD谱）;右旋园偏振光的合成;振幅（强度）不同，频率相同的左右偏振光合成椭圆偏振光，椭园度的正切为椭园短轴和长轴之比。;园二色性的关系式;园二色谱与二级结构;;二级结构计算;蛋白质的构象变化造成二级结构改变时，园二色谱发生变化。从而可以测定去折叠（变性）和重折叠（复性）的状态和变化;4. 红外光谱(RTIR);酰胺基团红外光谱;水溶液中酰胺I带特征频率指认;重水中酰胺I带特征频率指认;去卷积谱和二阶导数谱;红外光谱:去卷积谱曲线拟合;红外光谱:二级结构指认例;第三章 酶的结构与功能;1. 蛋白质折叠机制研究;折叠理论;变性复性研究;2.研究实例;动物脂肪酸合酶是一个典型多功能复合酶;荧光分析表现脂肪酸合酶的胍变性存在两阶段结构变化过程。;紫外差光谱，园二色谱研究也表现了两个构象变化阶段。 但在整体构象发生变化之前，该酶已不可逆失活。;巯基暴露测定;巯基暴露实验表现该酶三级结构打开和其它方法测定的第一阶段整体构象变化同步发生。;不可逆失活测定表明，该酶全反应的失活先于单独功能结构域的失活。;在很低胍浓度下该酶的全反应活性和两个单独还原中心活性同步被可逆抑制，且先于不可逆抑制的发生。;;;讨论;讨论（续）;讨论（续）;讨论（续）;;课外练习（记分）