生皮化学与组织学课件.pptVIP

酶反应动力学 抑制剂对酶反应的影响 反竞争性抑制：酶只有与底物结合后才与抑制剂结合，形成的三元中间产物不能进一步分解为产物，所以酶活性降低。 反竞争性抑制作用常见于多底物反应中，而在单底物反应中比较少见 酶反应动力学 抑制剂对酶反应的影响 酶反应动力学 抑制剂对酶反应的影响 不可逆抑制和可逆 抑制的动力学比较 酶活力测定 酶活力 酶活力也称酶活性，指酶催化一定化学反应的能力。其大小可用在一定条件下，它所催化的某一化学反应的反应速率（reaction rate）来表示。 酶反应速率 用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示。单位：浓度/单位时间 酶活力测定 酶的活力单位 1961年，提出用“国际单位”（IU）表示酶活力， 即：1个酶活力单位：是指在最适条件下，1分钟内能转化1u摩尔底物的酶量，或转化底物中1微摩尔有关基团的酶量。(25?C,最适底物浓度和最适pH） 1972年，提出新的酶活力国际单位：Kat单位：最适条件下，每秒钟能催化1mol底物转化为产物所需的酶量 1Kat=60×106 IU 酶活力测定 酶的比活力 代表酶的纯度，比活力用每mg蛋白质所含的酶活力单位数表示，对同一酶来说，比活力愈大，表示酶的纯度愈高。用IU/mg蛋白、 Kat/mg蛋白表示。 比活力大小可用来比较每单位质量蛋白质的催化能力。 比活力=活力IU/mg蛋白=总活力IU/总蛋白mg 转化数 在单位时间内每一活性中心或每分子酶所能转换的底物分子数。 用Kcat 表示 酶活力测定 产 物 浓 度 [P] (t) 引起酶反应速度降低的主要原因： 1、底物浓度的降低； 2、酶的部分失活； 3、产物对酶的抑制； 4、产物增加引起的逆反应速度的增加 可以用初速度来测定制剂中酶的含量。 酶活力测定 测定酶活力时应注意 （1）应测反应初速度 （2）酶的反应速度一般用单位时间内产物的增加量来表示。 （3）测酶活力时应使反应温度、pH、离子强度和底物浓度等因素保持恒定。 （4）测定酶反应速度时，应使[S][E]。 产 物 浓 度 [P] (t) 酶活力测定 制革生产中用的酶主要是一些蛋白酶，所以下面主要介绍几种工业生产中蛋白酶活力的测定方法。 酶活力测定 由于各种酶的性质及最适反应条件不同，无法规定一个统一的酶活力测定方法 目前工业上蛋白酶制剂活力测定使用最广泛的方法有 Folin法——福林法 LVU法 甲醛滴定法 转化倍数法 酶活力测定 Folin法 原理： 酪素在蛋白酶的催化作用下，水解生成含有酚基的氨基酸（Tyr）。在一定条件下，生成的Tyr越多，说明该酶制剂的催化能力越强 在碱性条件下， Tyr和Folin试剂反应生成钼蓝和钨蓝，蓝色的深浅与酚类化合物含量成正比，因此，通过比色测定，可确定出Tyr含量，从而计算出酶的活力 定义：1g固体酶粉（或1ml液体酶），在一定温度和pH条件下，1min水解酪素产生1ug Tyr为一个酶活力单位，以u/g（u/ml） 酶活力测定 LVU法 原理： 碱性酪素溶液在标准条件下（T：37℃，pH：8.2），进行酶解反应，一定时间后（一般60min），加入盐酸终止反应，未酶解酪素以硫酸钠沉淀。滤液用标准NaOH溶液滴定，滤液中的酸包括加入的盐酸和酪素降解产生的酸，酪素降解越多，滤液中的酸就越多，沉淀就越少。滴定所耗NaOH的量直接反应酶活力大小 定义：在标准条件下（T：37℃，pH：8.2），酶与酪素反应60min，水解1.725mg酪素所需的酶量为一个酶活力单位 酶活力测定 甲醛滴定法 原理： 蛋白酶与酪素在一定条件下发生水解，用甲醛固定水解产物的氨基，用NaOH溶液滴定羧基。根据样品滴定与空白滴定所耗0.1mol/L NaOH溶液体积之差，计算每1mL酶液所生成的氨基氮的毫克数即为酶活力 1mL 0.1mol/L NaOH相当于1.4mg氨基氮 酶活力测定 胰酶转化倍数法 原理： 胰酶于定量的酪素反应，水解一定时间后，用乙酸盐（或乙酸）调节反应溶液的pH至酪素等电点附近，使未水解的酪素沉淀析出，而水解的酪素则不会析出，酪蛋白被水解的量越大，表明胰酶的活力越高 定义：1g胰酶完全转化酪素的克数为工业胰酶的转化活力 制革常用酶制剂 制革中常用的酶制剂，主要是蛋白水解酶，其次是脂肪酶 目前，在准备工段的各个工序几乎都与酶的应用，如浸水、脱脂、脱毛、软化，也可用于鞣后蓝湿革的软化与脱脂 工业用的蛋白酶一般纯度不高 制革常用酶制剂 酶法鞣制是最近提出的一个新概念，尽管目前酶鞣制有点象天方夜谭不可预期，但这正好预示着酶一这种生物制剂在皮革工业中的应用方兴未艾。 制革常用酶制剂 中性蛋白酶 枯草杆菌AS1.398中性蛋白酶 主要用于脱毛，也可在软化工序作为辅助酶软剂和部位差处理剂用 pH=7时