获能和顶体反应.pptVIP

* 二. 顶体反应 当获能的精子接近或进入卵丘细胞或与卵透明带结合时被激活，其头部发生顶体反应或称胞吐作用(exocytosis)。顶体反应使精子顶体内所含的顶体酶释放出来，支持精子穿过卵透明带，从而导致精卵融合即受精。 第30页，共49页。 * AR时细胞内Ca2+浓度的增加 Ca2+在AR过程中起着关键的作用, 大多数诱导剂诱导精子发生AR时, Ca2+内流是早期的反应之一. 第31页，共49页。 * 第32页，共49页。 * 检测顶体反应的方法 电镜法 相差显微镜法 CTC法 Hoechst 33258法 考马氏亮蓝染色法 第33页，共49页。 * 电镜法 第34页，共49页。 * 相差显微镜法 该法适用于观察顶体较大的动物精子, 如豚鼠, 仓鼠,麝. 顶体较小的精子不能用该法观察. 如小鼠,大鼠,兔. 第35页，共49页。 获能和顶体反应 第1页，共49页。 * 精子获能、顶体反应和与透明带的结合 曾海涛 中南大学生物科学与技术学院 第2页，共49页。 * 国家中长期科学和技术发展规划纲要（2006-2020） 六、基础研究 4.重大科学研究计划 （4）发育与生殖研究 第3页，共49页。 * 第4页，共49页。 * 一. 精子获能 哺乳动物精子在离开雄性生殖道时，还不能立即与卵子受精。它必须在雌性生殖道内经历一段成熟过程，才获得受精能力。 这一现象称为获能（1951年张民觉和Austin）。 第5页，共49页。 * 体外获能 体内获能的研究．常受到某些条件的限制。从雌性生殖道内．特别是输卵管内回收到的精子数量太少，不易检测获能精子化学成分的改变。因此, 研究精子获能一般采用体外获能的方法。 第6页，共49页。 * 第7页，共49页。 * 影响获能的一些因素(温度、pH、渗透压) 大多数动物精子体外获能的温度为37—38℃。有的动物(猪和羊)精子获能的最佳温度为39℃。 第8页，共49页。 * 获能的最适pH为7. 4 — 8.0。低于6.7时获能时间大大延长；豚鼠精子pH低于7.6时则获能时间需24 h。pH高于8.2时，可缩短精子获能时间，但不利于精子生存。 第9页，共49页。 * 渗透压对精子获能也产生重要影响。低于270 mOsm／kg H2O 或高于343 mOsm／kg H2O 则影响精子获能进程。最适宜的渗透压为295～310 mOsm／kgH2O 第10页，共49页。 * 获能的种间和种内差异 体外获能所需要的时间，种间存在着较大差异。在一些种类动物获能最短时间为0.5- 1h．如小鼠；另一些种类生物则需要7～8h，如兔及人。 第11页，共49页。 * 精子获能的异质性 从同一个体射出的所有精子并不是同时发生获能。一些精子获能较快，另一些则较慢，即所谓获能上的“异质性”或非均一性。 第12页，共49页。 * 精子获能的可逆性 张民觉(1958)最早发现精子获能是一个可逆过程，获能精子一旦与精浆和附睾液接触，又可去获能(decapcitation)。如果把去获能的精子转移到雌性生殖道中，并使之停留一段时间，精于又可重新获能。表明精浆和附睾液中存在着一种去获能因子(decapcitation factor，DF)。如用超速离心除去DF，精子也可重新获得受精能力。表明DF参与获能的调节。一般认为DF是一种糖蛋白。 第13页，共49页。 * 获能期间精子出现的各种变化 1.胆固醇是维持细胞正常结构和功能所必需的成分。质膜脂质双层内有丰富的胆固醇。获能期间精子质膜胆固醇外流。精子质膜胆固醇的丧失可使膜蛋白的分布发生改变; 可使膜的通透性发生改变, 进而促进获能。 第14页，共49页。 * 人输卵管液中含有的白蛋白(HSA)，能结合并移去胆固醇；输卵管液高浓度的高密度脂蛋白(HDL)可直接诱导胆固醇外流，其作用比白蛋白更强.在精子体外获能时，获能液中的牛血清白蛋白(BSA)，在有HCO3- 存在时可与胆固醇结合，以浓度依赖方式刺激胆固醇外流。 第15页，共49页。 * 获能期间精子出现的各种变化 2.胞内离子的改变 精子获能期间一些胞外Ca2+进入胞内，胞内Ca2+逐步升高，并呈时间依赖关系. HCO3-浓度增加. Ca2+和HCO3-均能刺激腺苷酸环化酶(AC)合成cAMP，胞内cAMP升高进而促进精子获能. 第16页，共49页。 * 3.活性氧 第17页，共49页。 * 4.磷酸化 第18页，共49页。 第19页，共49页。 第20页，共49页。 * 检测精子获能的方法