谷氨酸生产菌的选育.ppt

* * 谷氨酸生产菌的选育 第1页，共14页。 谷氨酸生产菌的选育方法，主要是采用常规的诱变育种及遗传工程技术构建工程菌株。 第2页，共14页。 诱变育种 利用各种诱变剂处理微生物细胞，提高基因的随即突变频率，扩大变异幅度，通过一定的筛选方法，获取所需要优良菌株的过程，称为诱变育种。 第3页，共14页。 诱变育种包括诱变和筛选两个部分：首先，以合适的诱变剂处理大量而均匀分散的微生物细胞悬浮液，在引起绝大多数细胞致死的同时，使存活个体中DNA结构用适宜的方法淘汰负效应变异株，选出极少数性能优良的正变异株，以达到培育优良菌株的目的。 第4页，共14页。 诱变育种的基本流程 合适的出发菌株→制备待处理的菌悬液→诱变处理→筛选→保藏和扩大试验 第5页，共14页。 谷氨酸生产菌的诱变育种流程 以菌株ASL299为出发菌株，采用复合诱变剂进行诱变 第6页，共14页。 在诱变育种实践中，为了获得协同效应，常常采取诱变剂进行复合处理，可以是两种或多种诱变剂的先后使用，或是同一种诱变剂的重复使用，或是两种或多种诱变剂的同时使用。 第7页，共14页。 出发菌株ASL299→菌悬液制备→硫酸二乙酯诱变→单氟乙酸平板筛选→高糖平板筛选→高谷氨酸平板筛选→摇瓶筛选→DES突变株→原生质体制备→紫外线诱变→原生质体再生→香豆素和氯化锂平板筛选→谷氨酸为唯一碳源平板筛选→摇瓶筛选→UV突变株→稳定性试验→生产条件试验 第8页，共14页。 谷氨酸菌诱变选育操作步骤 （1）菌悬液的制备 将出发菌株AS1.299斜面菌接入一级种子培养集中，32摄氏度振荡培养8h，离心去清夜，加入7.0缓冲液稀释菌体泥制菌悬液。 （2）硫酸二乙酯诱变 在菌悬液中加入硫酸二乙酯，使硫酸二乙酯浓度为1%（体积分数），在电磁搅拌下处理20—30分钟，处理后加入硫代硫酸钠终止反应。 第9页，共14页。 （3）单氟乙酸平板筛选 将诱变的菌悬液涂布在含0.5%单氟乙酸的平板上，在32摄氏度的条件下避光培养36—48h,挑取生长良好的菌落。 （4）高糖平板筛选与高谷氨酸平板筛选 将抗单氟乙酸的菌株涂在含25%葡萄糖的平板上，培养48h后，挑取生长良好的菌落，可得到耐高糖菌株。然后，将耐高糖菌株涂在含20%谷氨酸的平板上，培养48h后，挑取生长良好的菌株，即得到耐高谷氨酸菌株。 （5）摇瓶筛选 将突变株接入摇瓶发酵培养集中，进行摇瓶发酵，比较菌株的谷氨酸产量，选出谷氨酸高产菌株。 第10页，共14页。 * *