第一节核酸的分离纯化.pptVIP

（二）核蛋白的解聚、变性蛋白的去除 核酸与蛋白质的结合力主要是正负静电吸力(核酸与碱性蛋白的结合)、氢键和非极性的范德华力。 分离核酸最困难的是将与核酸紧密结合的蛋白质分开，同时避免核酸降解。 第三十页，共四十五页，2022年，8月28日 常用方法： 1 加入浓盐溶液（如NaCl） 核酸-蛋白质加入NaCl后，破坏静电吸力，使氢键破坏，核蛋白解聚； 2 加入SDS SDS除有破胞和抑制核酸酶的作用外，还具有使核酸从蛋白质上游离出来的功能； 第三十一页，共四十五页，2022年，8月28日 3 酚/氯仿抽提 酚／氯仿混合使用能增加去除蛋白的效果，并对核酸酶有抑制作用。 氯仿比重大，能加速有机相与水相分层，减少残留在水相中的酚，同时氯仿具有去除植物色素和蔗糖的作用。 在酚/氯仿抽提核酸提取液时，需要振摇，为防止起泡和促使水相与有机相的分离，再加上一定量的异戊醇（酚：氯：异戊醉=25：24：1）。 第三十二页，共四十五页，2022年，8月28日 第一页，共四十五页，2022年，8月28日 分子生物学研究之所以从20世纪中叶开始得到高速发展，其中最主要的原因就是现代分子生物学研究方法、特别是基因操作和基因工程技术的进步。 DNA分子的切割与连接 核酸分子杂交 凝胶电泳 细胞转化 核酸序列分析 基因的人工合成 基因操作 基因的定点突变 PCR扩增等 核心技术 第二页，共四十五页，2022年，8月28日 基因工程诞生的基础 1、理论上的三大成就 2、技术上的二大发明 第三页，共四十五页，2022年，8月28日 三大成就 ： 1. 40年代确定了遗传信息的携带者，即基因的分子载体是DNA而不是蛋白质，解决了遗传的物质基础问题； 1928 Frederick Griffith 1944 Oswald Avery Transformation of Streptococcus pneumoniae 1952年Hershey和Chase证实噬菌体DNA 侵染细菌实验 第四页，共四十五页，2022年，8月28日 2. 50年代揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半 保留复制机制,解决了基因的自我复制和世代交替问题； X-ray source Crystallized DNA Rosalind Franklin拍出 了第一张能反映DNA美丽双螺旋结构的X射线照片 Maurice Wilkins Photographic film 1953- Franklin Wilkins 第五页，共四十五页，2022年，8月28日 Description of the 3-D structure of DNA Francis Crick James Watson 三位科学家因为对这一 成果的贡献，共享1962年的诺贝尔生物学奖 第六页，共四十五页，2022年，8月28日 Conservative Model Semiconservative Model Frank Stahl Matt Meselson Parent cell First replication Second replication 1958 -Matthew Meselson Franklin Stahl proved that DNA replication in bacteria follows the semiconservative pathway 第七页，共四十五页，2022年，8月28日 3. 50年代末至60年代，相继提出了中心法则和操纵子学说,成功地破译了遗传密码，充分认识了遗传信息的流动和表达。 Jacob and Monod 第八页，共四十五页，2022年，8月28日 但是，如果没有分离和富集单一DNA分子的技术，科学家就无法对这类物质进行直接的生化分析。 第九页，共四十五页，2022年，8月28日 两大技术保证： 1.DNA的体外切割和连接 1962年Arber 发现限制性核酸内切酶， 1967Gellert发现了 DNA 连接酶（DNA ligase ） 第十页，共四十五页，2022年，8月28日 一把特殊的剪刀—限制性内切酶的发现阿尔伯(Arber)、史密斯(Smith)和内森斯(Nathans)，获1978年诺贝尔生理学和医学奖 第十一页，共四十五页，2022年，8月28日 Herbert Boyer, Stanley Cohen 1972年获得第一个重组DNA分子 (实现不同来源DNA的重组) Herbert Boyer 第十二页，共四十五页，2022年，8月28日 1972 - Paul Berg Produced first recombi