高效液相色谱分析操作条件选择.ppt

高效液相色谱分析操作条件选择 第1页，共13页。 目录 实验目的 实验原理 仪器与试剂 实验步骤 仪器清洗（结束工作） 第2页，共13页。 一、实验目的 掌握色谱分析的原理 掌握高效液相色谱仪的基本结构和工作原理 掌握SY-8100高效液相色谱仪的基本操作步骤 掌握HPLC条件试验的方法以及分离条件的确定 第3页，共13页。 二、实验原理 本次实验采用ODS-C18色谱柱，以甲醇+水混合液为流动相，根据混合物中萘、联苯和菲在固定相与流动相间分配性质的不同，进行分离。不同比例的甲醇+水混合液为流动相，流动相的极性发生改变，因此混合液的分离条件也发生了改变，选择能将混合液中各组分能充分分离并且相对分析时间短的条件，综合确定HPLC法分析萘、联苯、菲的分析条件，完成对混合液的分析。 检测器采用紫外分光（UV）检测器，检测波长为254nm。 第4页，共13页。 三、仪器与试剂 仪器： SY-8100高效液相色谱仪 1台 KQ-50B超声波清洗器 1台 AP-01P真空泵 1台 过滤装置 1套 微量注射器 50μL 1支 容量瓶 50mL 7只 药品： 萘（G.R.）、联苯（G.R.）、菲（G.R.）、甲醇（G.R.）、二次蒸馏水 第5页，共13页。 四、实验步骤 流动相的准备 1、流动相的过滤 安装抽滤装置，选用有机相过滤膜，过滤试剂甲醇；选用无机相过滤膜，过滤二次蒸馏水。 第6页，共13页。 2、流动相的脱气 将盛有过滤好甲醇、二次蒸馏水的试剂瓶分别放于超声波清洗器中，进行脱气处理。 第7页，共13页。 仪器的准备 1、更换流动相 将A泵的输液管放入处理好的甲醇试剂瓶中；B泵的输液管放入处理好的二次蒸馏水试剂瓶中。 2、分别排除A、B两个泵输液管中的气泡 第8页，共13页。 3、开启高压泵A、高压泵B、UV检测器、混合器的电源，打开工作站 第9页，共13页。 分析步骤 1、分别设置两个高压泵的流量，使总流量为F＝1.00mL/min，分别启动两泵 第10页，共13页。