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探索色谱新领域,默克与您共同努力! 2002-9 * 高效液相色谱分析方法开发 xx/xx/xxxx Page * * 第1页,共7页。 开发分析方法的规则 合适的保留因子k (k值1-20)是获得满意分离的基础 保留因子 k=(tR-tM)/tM 用以下“秘诀”可以使您的开发过程更加简便、快速 第2页,共7页。 揭秘选择合适的起始条件 不同的样品不同的思路 中性化合物无需调整流动相的pH值;而对于含有带电基团的 化合物,则需要用缓冲溶液调整流动相的pH值;有时需要 采用离子对反相色谱 选用通用的色谱柱 一般直接选用C18(或C8) 5um 12.5, 15, 25cm 长的色谱柱 选择流动相 甲醇/水或乙腈/水(依据个人习惯而定) 第3页,共7页。 流动相的调整“秘诀” 秘诀1 由强到弱 一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验, 这样可以很快地得到分离结果,然后根据出峰情况调 整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。 第4页,共7页。 流动相的调整“秘诀” 秘诀2 三倍规则 每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量, 保留因子约增加3倍,此为三倍规则。这是 一个聪明而又省力的办法。调整的过程中, 注意观察各个峰的分离情况。 第5页,共7页。 探索色谱新领域,默克与您共同努力! 2002-9 *
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