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— — PAGE 1 — 小鼠模型在眼科疾病研究中的应用与验证数据解释  近期，又一款眼科基因治疗的新型药物HG004获得**FDA授予的孤儿药资格认定，用于治疗由RPE65突变引起的遗传性视网膜疾病。HG004注射液利用重组AAV载体递送，在研发过程中，还使用到了Rpe65的基因敲除小鼠以模拟疾病患者的视网膜表型和功能。 出于眼睛的独特结构，眼科疾病已成为基因治疗的理想适应症，随着该疗法日渐兴起，临床前对应的小鼠模型需求也日趋旺盛。在基因同源性方面，小鼠基因组与人类相似度近90%；在眼睛结构方面，小鼠的视锥细胞与视杆细胞数目比也与人类接近，因此，建立合适的小鼠模型已成为当前多数基因治疗研究人员的不二选择。 眼科疾病模型推荐  针对先天性黑蒙症、进行性黄斑变性、视网膜色素变性、视网膜变性等眼科疾病，赛业生物开发了一系列基因编辑和人源化小鼠模型；针对研究人员的需求，也可定制或合作开发基因编辑小鼠模型，如基因敲除、基因敲入、点突变、人源化小鼠模型及大小鼠手术疾病模型，加速药效学验证实验的开展。 验证数据以TG-VEGFA小鼠为例 这款自研的TG-VEGFA小鼠，是赛业生物建立的牛视杆细胞特异性启动子驱动人源VEGFA基因CDS序列表达的模型，以获得能在视网膜特异性过表达人源VEGFA基因的转基因小鼠。 人源和鼠源VEGFA基因表达水平检测利用qPCR检测小鼠体内人源VEGFA和鼠源VEGFA基因表达，结果显示相比野生型小鼠，TG-VEGFA小鼠能高表达人源VEGFA，且鼠源VEGFA基因的表达量与野生型小鼠相当。表明该小鼠在过表达人源VEGFA的同时不会影响本底鼠源VEGFA的表达。TG-VEGFA小鼠和C57BL/6J野生型小鼠中人源VEGFA和鼠源VEGFA基因表达的检测视网膜光学相干断层扫描（OCT）检测通过视网膜光学相干断层扫描（OCT）对小鼠的视网膜形态进行检测，结果显示与野生型相比，TG-VEGFA小鼠的脉络膜区域的结构存在结构紊乱。6周龄TG-VEGFA小鼠和C57BL/6J野生型小鼠的眼底和视网膜形态检测F0代小鼠眼底荧光血管造影（FFA）通过FFA对小鼠的眼部血管进行造影观察，结果显示与野生型相比，TG-VEGFA F0代小鼠的眼底出现血管病变，表现为大面积荧光素钠渗漏。6周龄TG-VEGFA F0代小鼠和C57BL/6J野生型小鼠的眼底荧光血管造影（FFA）结果F1代和F2代小鼠眼底荧光血管造影（FFA）通过FFA对F1代和F2代的TG-VEGFA小鼠眼部血管进行造影观察，结果显示F1代和F2代小鼠均能复现F0代小鼠的表型，表现为大面积荧光素钠渗漏的血管病变表型。F1代和F2代TG-VEGFA小鼠眼底荧光血管造影（FFA）结果 视网膜电图（ERG）检查 视网膜电图（ERG）的检测结果显示TG-VEGFA小鼠（hVEGFA）的视网膜电位与野生型小鼠（WT）暂无显著差异。TG-VEGFA小鼠和野生型小鼠的视网膜电图（ERG）检测的结果视网膜HE染色通过HE染色对小鼠视网膜进行检测，检测结果显示与野生型（C57BL/6J）相比，TG-VEGFA小鼠的视网膜区域存在血管增生的病理性表型。TG-VEGFA小鼠和野生型小鼠眼部HE染色结果视网膜和脉络膜isolectin GS-lB4免疫染色通过lB4染色对小鼠视网膜和脉络膜进行检测，检测结果显示与野生型相比，TG-VEGFA小鼠的视网膜存在血管的异常增生，且结构紊乱，同时脉络膜区域也观察到有异常增生的情况。TG-VEGFA小鼠和野生型小鼠眼部视网膜和脉络膜Isolectin GS-lB4免疫染色结果阿柏西普（Aflibercept）药效验证眼底荧光血管造影（FFA）的结果显示，阿柏西普给药前TG-VEGFA小鼠的眼底存在明显的血管病变和大面积荧光素钠渗漏。在阿柏西普给药后，与PBS对照组相比，阿柏西普组中TG-VEGFA小鼠眼部血管病变显著减轻，血管渗漏面积显著减小。TG-VEGFA小鼠用于VEGF靶向药物阿柏西普（Aflibercept）的药效验证