省时省力核酸提取解决方案的操作与运用技巧.docxVIP

— — PAGE 1 — 省时省力核酸提取解决方案的操作与运用技巧 对于广大的生物科研人员来说，养细胞、养细菌、提核酸等都是实验室的常见操作，实验操作费时费力，过程中可能还会遇到各种坑。今天我们想聊一下，怎样让您的核酸提取不再烦恼！核酸分为脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），它是由许多核苷酸单体聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。核酸的提取分别为DNA 提取和RNA提取，二者的提取原理大致相同,简单来说分为细胞或者组织的裂解和核酸纯化两大步骤。核酸提取纯化方法常用的有酚/氯（l）仿抽提法、离心柱法、磁珠法等。1、酚/氯（l）仿抽提法乙（xi）烯氯（l）仿提取DNA是利用酚是蛋白质的变性剂，反复抽提，使蛋白质变性，SDS(十二烷基磺酸钠)将细胞膜裂解，在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子，变性降解核蛋白，使DNA从核蛋白中游离出来。酚/氯（l）仿抽提法的优点是成本较低，对实验条件要求也不高。该方法的缺点也很明显：由于使用了苯（fen）酚、氯（l）仿等有机试剂，毒性较大，长时间操作对人员健康有较大影响；而且核酸的回收率较低，损失量较大。离心柱纯化这里以DNA提取离心柱为例。离心柱结构主要是特殊硅基质吸附材料，能特异性吸附DNA，而RNA与蛋白质则会穿过。该方法能选择性地吸附核酸而不吸附蛋白质及盐，从而实现核酸与蛋白质及盐的分离，是目前试剂盒提取广泛使用的方法。该方法受人为操作因素影响小，提取DNA的纯度稳定性很高；而且离心柱法提取DNA的纯度比传统酚氯（l）仿法提取的要高。离心柱法其低廉的价格和相对便捷的操作，渐逐取代了传统DNA提取方法，被高校科研所等市场普遍接受。该方法的缺点是需要较多的样本，对于珍稀样本则不适合采用此方法。当样品过量时，需要反复进行离心，对样品的提取效率较低，不便于高通量、自动化操作。与现代生物学实验的高通量、自动化要求格格不入，特别是在基因诊断、疾病检测、转基因检测等领域，离心柱法DNA提取需要大量的操作人员及仪器设备。当面对突发疫情时，更是需要有高通量的DNA提取设备与方法才能更有效准确的监测疫情、控制疫情。磁珠法磁珠法是一种固相载体可逆化固定（SPRI）的分离纯化方法，主要原理为：在不同浓度的PEG（polyethylene glycol；聚乙二醇）中，会有不同片段大小的DNA吸附在磁珠的羧基修饰层上，这些DNA可以再溶解在水中，以此来洗脱回收。实验使用的磁珠分为五层，由内而外依次为：聚苯乙（xi）烯材料的核心、超顺磁材料（主要为四氧化三铁）、第二层聚苯乙（xi）烯材料、第二层超顺磁材料以及表面粗糙的羧基修饰层。粗糙的表面更利于核酸与羧基修饰层结合。该方法将纯化介质包被在纳米级的磁珠表面，通过介质对DNA的吸附，在外加磁场的作用下使DNA附着于磁珠并定向移动，从而达到核酸与其它物质分离的目的。与其它集中方法相比，磁珠法具有无可比拟的优势，包括：（1）提取灵敏度高 ，只需微量的样本就可以完成对核酸的提取；（2）纯化的纯度高 ，磁珠与核酸的特异性结合能使核酸充分与杂质分离，使得提取的核酸纯度高、浓度大；（3）能够实现自动化、大批量操作，通过机器自动化完成操作，所需人力少，而且同时可以完成多个样本的大批量操作。以32孔的核酸自动提取仪为例，用一个样品的提取时间即可实现对最多32个样品的处理，符合生物学高通量的操作要求，使得传染性疾病爆发时能够进行快速及时的应对。（4）操作简单、用时短，整个提取流程只有四步，根据仪器不同，部分仪器提取时间可以缩短到30分钟，大大提高了实验效率；（5）安全无毒，不使用传统方法中的苯、氯（l）仿等有毒试剂，对实验操作人员的伤害减少到最少，完全符合现代环保理念；近年来磁珠法已成为核酸提取的必备工具之一，也是核酸自动化提取设备的必备组件之一。对于实验样本量大，经常做实验的实验人员来说，自动核酸提取仪是一个不错的选择。而且对于各类核酸，不论是质粒DNA、基因组DNA，还是RNA等，一台自动核酸提取仪都可以满足实验人员的提取要求。我们看下的国外某知名品牌R 和柏恒科技（Bio-gener）即将上市的自动核酸提取仪的部分系统性能数据对比。BrandBrand RBio-generMagNA Pure LC 2.0 System*BGNA-32P# of Samples1-32 samples per run1-32 samples per runRun Time~1 hour10~50 minsStarting SamplesWhole Blood, Plasma, Serum, Cell Culture, Tissue, Body Fluids, Fresh Frozen and