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《食品微生物检验技术》课程作业要求 班级： 食生 111 学号： 53 姓名：樊继国分数 黄豆酱中微生物的检验 一、国家标准中鱼类罐头需检测的微生物种类及标准微生物种类菌落总数酵母霉菌金黄色葡萄球菌国家标准 100cfu/ml≤100cfu/ml≤30cfu/ml 不得检出二、黄豆酱中菌落总数的检测 1、实验原理 菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度，与培养基混合， 在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。 菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。本方法规定的培养条件下所得到的结果，仅包括在培养琼脂上面生长的嗜中温性的菌落总数。 2、实验器材 2.1 仪器： 冰箱：2℃～5℃。 恒温培养箱：28℃±1℃。均质器。恒温振荡器。显微镜：10 某～100 某。电子天平：感量 0.1g。 无菌锥形瓶:容量 500mL、250mL。无菌广口瓶：500mL。 无菌吸管：1mL(具 0.01mL 刻度)、10mL(具 0.1mL 刻度)。菌平皿：直径 90mm。无菌试管:10mm 某 75mm 无菌牛皮纸袋、塑料袋。 2.2 培养基：平板计数琼脂培养基⑴组成成分1.0g 葡萄糖 2.5g 酵母浸膏 5.0g 胰蛋白胨 15.0g 琼脂 1000mL 蒸馏水 PH7.0±0.2 ⑵营养琼脂培养基的配置 ①取 20g 营养琼脂培养基放到三角瓶并且加入 1000mL 的蒸馏水，然后震荡摇匀。②然后用脱脂棉做成棉塞塞到三角瓶口，用牛皮纸包扎好。 ③放到高压锅内以高温、十五分钟杀菌 ④杀菌后，取出培养基，自然冷却到 40℃左右备用 ⑶琼脂培养基做法 把组成成分里面的成分加入到蒸馏水中煮沸溶解，然后调节PH，装到试管里面和三角瓶中，在高温杀菌十五分钟左右。 2.3 磷酸盐缓冲液 2.31 成分34.0g 磷酸二氢钾 500.0mL 蒸馏水 PH7.2 贮存：取 34g 的磷酸二氢钾放入烧杯中，并倒入 500mL 蒸馏水，用1mol/L 的氢氧化钠溶液调节PH，然后再用蒸馏水将其稀释到 1000mL 存到冰箱。 稀释：将贮存液中取 1.25mL，用蒸馏水将其稀释到 1000mL，装到三角瓶中高压灭菌锅中灭菌十五分钟。 2.4 无菌生理盐水8.5g 氯化钠1000mL 蒸馏水 做法：将氯化钠溶于 1000mL 蒸馏水中，高温杀菌十五分钟。3、操作步骤（1）样品处理 在无菌操作将取黄豆酱 25mL 放到 225mL 的灭菌生理盐水中，经充分的震荡并研磨制成 1：10 的均匀稀释液。 （2）具体操作方法 用 1mL 灭菌吸管 1：10 稀释液 1mL，注入含有 9mL 灭菌生理盐水试管中，用定量移液器在试管内鼓气使其均匀，做成 1：100 的稀释液。 稀释液在移入平皿后，注入冷却到 451℃营养琼脂将平皿底覆盖，放在桌上徐徐振摇，使培养基和检样混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有 1mL 稀释液的灭菌平皿中做空白实验对照。待平皿中的营养琼脂凝固后，将平板翻过来，放到 35 到 37 度的培养箱中培养两天左右。 菌落计数的方法：在做平板计数的时候，可以用肉眼观察，必要的时候用放大镜观察，以防止遗漏。在记下各个平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。 4、结果处理 2 稀释度平板菌落数 1210-13 平均 1210-23 平均 1210-33 平均三、酵母的检测 1.实验原理霉菌和酵母菌菌数的测定是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得 1g 或 1mL 检样中所含的霉菌和酵母菌菌落数。 2.实验器材 2.1 仪器和材料恒温培养箱冰箱天平均质器恒温振荡器无菌吸管无菌锥形瓶无菌广口瓶无菌平皿无菌试管 2.2 培养基和试剂 马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基、孟加拉红培养基 3.检样程序及方法 3.1 检样↓ 25g（mL）样品+225mL 无菌水，均质↓ 10 倍系列稀释↓ 选择 2-3 个适宜稀释度的样品匀液，各取 1mL 分别加入无菌培养皿内 ↓ 每皿加入 15-20mL 马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基或孟加拉红培养基↓ 培养 28±1℃，5d↓菌落计数↓报告 3.2 样品稀释 固体和半固体样品：称取 25g 样品至盛有 225mL 灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为 1:10 稀释液。或放入盛有 225mL 无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打 2min，制成 1:1