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植物细胞渗透势的测定(质壁分离法) 一、实验原理 组织细胞内的汁液与外界溶液处于渗透平衡时，若细胞的压力势Ψp=0，则细胞汁液的渗透势Ψs等于该溶液的Ψs。该溶液的浓度为组织细胞的等渗浓度。用质壁分离法测定时，细胞的等渗浓度界于刚刚能引起初始质壁分离的最低浓度和尚不能引起质壁分离的最高浓度之间。将等渗浓度的数值带入公式，可求出其Ψs。 二、器材与试剂 洋葱鳞片叶带有色素的外表皮，显微镜，培养皿，玻棒，1mol／L蔗糖溶液。 三、方法与步骤（见实验指导P5-6） 在洁净的培养皿内放入0.1～O.5 mol／L等梯度浓度蔗糖溶液各20ml，进行实验，以半数以上细胞发生初始质壁分离的最低浓度与不能引起质壁分离的最高浓度的平均值作为等渗浓度计算细胞的渗透势Ψs。 Ψs = -RTiC R：摩尔气体常数，0.083×105 L·pa/mol·k T：热力学温度（273oC + toC），单位k i：解离系数，蔗糖等于1 C：等渗溶液的摩尔浓度，单位mol／L 四、实验报告 1、绘图表示细胞质壁分离过程。 2、回答P8实验作业2。;组织细胞在等渗溶液当中处于渗透平衡时 Ψw（细胞）= Ψs（溶液） Ψw = Ψs + Ψp + Ψm + Ψg Ψw：细胞水势 Ψs：渗透势 Ψp：压力势（=0） Ψm：衬质势，通常忽略不计 Ψg：重力势，通常忽略不计 因此Ψw（细胞）= Ψs（细胞） 即Ψs（细胞） = Ψs（溶液） 该溶液的浓度称为组织细胞的等渗浓度（C）; 将组织细胞分别放入九个浓度的蔗糖溶液中（0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5），低浓度时，细胞不发生质壁分离，高浓度时，细胞发生质壁分离，实验中确定两个浓度A、B。 A：半数以上细胞发生初始质壁分离的最低浓度 B：不能引起质壁分离的最高浓度 C=（A+B）/2，将C代入公式Ψs = -RTiC Ψs：细胞渗透势 R：摩尔气体常数，0.083×105 L·pa/mol·k T：热力学温度（273oC + toC），单位k i：解离系数，蔗糖等于1 C：等渗溶液的摩尔浓度，单位mol／L;试剂 1 mol/L蔗糖溶液；超纯水 材料 洋葱球茎；擦镜纸；吸水纸； 盖玻片；载玻片；标签；刀片 仪器 显微镜；培养皿9套；玻棒9根；镊子1把； 移液枪5 mL 1支、量筒25 mL 1支;实验步骤 　　 　　1、取9个培养皿，编号，分别配制浓度为0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5mol/L的蔗糖溶液各20ml于培养皿内。 2、用镊子撕取同一鳞片的洋葱外表皮分别投入各浓度的蔗糖溶液中（每个浓度放置2片以上），使其完全浸没，约5-10min。 　;实验步骤 　　 　　3、从高浓度开始依次进行制片镜检，在载玻片上先用玻棒沾一滴同浓度的蔗糖，再取材料，展平，盖上盖玻片。 4、将水浸片放入显微镜下观察质壁分离的情况，检查邻近20个以上细胞，记录观察结果。; 硝酸还原酶将N03-还原为N02-，产生的N02-可以从组织内渗透到外界溶液中，并积累在溶液中，测定反应液中的N02-含量的多少，就表示硝酸还原酶活性的大小。 N02-含量的测定用磺胺比色法。在酸性溶液中磺胺与N02-形成重氮盐，重氮盐再与α-萘胺偶联形成紫红色的偶氮染料，这种偶氮染料在520nm处有最大吸收峰，因此选用波长520nm分光光度法进行测定。 ; 根据Lambert-Beer定律：物质对光的吸收，吸收的光量与物质的浓度、溶液的厚度成比例关系，用公式表示为 A=KLC K为吸收系数，表示物质对光的吸收特性，为定值 L为溶液厚度，比色杯直径为1cm KL为固定值，C溶液浓度越大，则吸光度越大 ; 器材与试剂 油菜叶片、小白菜叶片、 UV-1100型紫外/可见分光光度计、20毫升针筒、打孔器、恒温箱、天平、比色皿、三角瓶、移液枪、擦镜纸、吸水纸 0.1 mol/L pH7.5磷酸缓冲液、O.2M KNO3溶液、磺胺试剂、α-萘胺试剂、超纯水;方法与步骤 1、用直径1cm的打孔器打出油菜叶圆片100片，各投50片(先称重)至溶液 (1)磷酸缓冲液5 ml + 蒸馏水5 ml (2)磷酸缓冲液5 ml + KNO3溶液5ml 分别将溶液(1)(2)倒入20毫升针筒内，用针筒抽气使叶圆片中的空气抽去直至叶圆片沉于溶液中，将此溶液倒回三角瓶置于30℃恒温箱中，保温作用30min后测定N02-