分子生物学从mRNA到蛋白质.pptxVIP

分子生物学从mRNA到蛋白质;蛋白质是生物信息通路上的终产物，一个活细胞在任何发育阶段都需要数千种不同的蛋白质。因此，活细胞内时刻进行着各种蛋白质的合成、修饰、运转和降解反应。 ;4. 1 遗传密码——三联子;;4. 1. 1 三联子密码及其破译 ;Crick等人发现T4噬菌体rII位点上两个基因的正确表达与它能否侵染大肠杆菌有关，用吖啶类试剂（诱导核苷酸插入或从DNA链上丢失）处理使T4噬菌体发生移码突变（frameshift mutation），噬菌体就丧失感染能力。;若在模板mRNA中插入或删除一个碱基，会改变该密码子以后的全部氨基酸序列。 若同时对模板进行插入和删除试验，保证后续密码子序列不变，翻译得到的蛋白质序列就保持不变（除了发生突变的那个密码子所代表的氨基酸之外）。;;对烟草坏死卫星病毒的研究发现，其外壳蛋白亚基由400个氨基酸组成，而相应的RNA片段长约1 200个核苷酸，与假设的密码三联子体系正好相吻合。;1.以均聚物、随机共聚物和特定序列的共聚物为模板指导多肽的合成。 Nirenberg把多聚（U）作为模板加入到无细胞体系时发现，新合成的多肽链是多聚苯丙氨酸，确定UUU代表苯丙氨酸（Phe）。 以多聚（C）及多聚（A）做模板得到的分别是多聚脯氨酸和多聚赖氨酸。;以多聚UG为模板合成的是多聚Cys和Val，因为多聚（UG）中含Cys和Val的密码： 5……UGU GUG UGU GUG UGU GUG……3 无论读码从U开始还是从G开始，都只能有UGU（Cys）及GUG（Val）两种密码子。;Nirenberg及Ochoa等又用各种特定序列如只含A、C的共聚核苷酸作模板，任意排列时可出现8种三联子，即CCC、CCA、CAC、ACC、CAA、ACA、AAC、AAA，获得由Asn、His、Pro、Gln、Thr、Lys等6种氨基酸组成的多肽。;以多聚（UUC）为模板，可能有3种起读方式： 5……UUC UUC UUC UUC UUC……3 或5……UCU UCU UCU UCU UCU……3 或5……CUU CUU CUU CUU CUU……3 产生UUC（Phe）、UCU（Ser）或CUU（Leu），得到多聚苯丙氨酸、多聚丝氨酸或多聚亮氨酸。因此，UUC、UCU、CUU分别是苯丙氨、丝氨酸及亮氨酸的密码子。;当然，也可能只合成2种均聚多肽，如： 5……GUA GUA GUA GUA GUA……3 或5……UAG UAG UAG UAG UAG……3 或5……AGU AGU AGU AGU AGU……3 由第二种读码方式产生的密码子UAG是终止密码，不编码任何氨基酸，因此，只产生2种密码子GUA（Val）或AGU（Ser），合成多聚缬氨酸或多聚丝氨酸。;2. 核糖体结合技术 ;若用20种AA-tRNA做20组同样的实验，每组都含20种AA-tRNA和各种三核苷酸，但只有一种氨基酸用14C标记，看哪一种AA-tRNA被留在滤膜上，进一步分析这一组的模板是哪个三核苷酸，从模板三核苷酸与氨基酸的关系可测知该氨基酸的密码子。;表4-1 三核苷酸密码子能使特定的氨基酰-tRNA结合到核糖体上 ;4. 1. 2 遗传密码的性质 ;表4-2 通用遗传密码及相应的氨基酸 ;;;;除色氨酸（UGG）只有一个密码子外，其他氨基酸都有一个以上的密码子。9种氨基酸有2个密码子，1种氨基酸有3个密码子，5种氨基酸有4个密码子，3种氨基酸有6个密码子（表4-3）。 由一种以上密码子编码同一个氨基酸的现象称为简并（degeneracy），对应于同一氨基酸的密码子称为同义密码子（synonymous codon）。AUG和GUG既是甲硫氨酸及缬氨酸的密码子又是起始密码子。;;;3. 密码子与反密码子的相互作用 ;图4-4 mRNA上的密码子与tRNA上的反密码子配对示意图 ;在密码子与反密码子的配对中，前两对严格遵守碱基配对原则，第三对碱基有一定的自由度，可以“摆动”，因而使某些tRNA可以识别1个以上的密码子。 一个tRNA究竟能识别多少个密码子是由反密码子的第一位碱基的性质决定的，反密码子第一位为A或C时只能识别1种密码子，为G或U时可以识别2种密码子，为I时可识别3种密码子。;表4-5 tRNA上的反密码子与mRNA上密码子的配对与“摆动”分析 ;多个密码子同时编码一个氨基酸，凡是第一、二位碱基不同的密码子都对应于各自独立的tRNA。 原核生物中大约有30-45种tRNA，真核细胞中可能存在50种 tRNA。;4. 2 tRNA ;;最常见tRNA分子有76个碱基，相对分子质量约为2.5×104，不同的tRNA分子可有74～95个核苷酸不等。 D臂中存在多至3个可变核苷酸位点，17：1及20：1、20：2。最常见的D臂缺失这3个核苷酸，而