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LC-MSMS System Liquid Chromatography Coupled With Mass Spectrometry液质联用系统 What’s LC-MSMS? What’s Mass Spectrometry ? 质谱分析过程： 样品通过进样系统进入离子源，由于结构性质不同而电离为各种不同质荷比（m/z）的气态离子（母离子、碎片离子）； 带有样品信息的离子被加速进入质量分析器，不同的离子在质量分析器中被分离并按质荷比大小依次抵达检测器，经纪录即得到按质荷比排列的离子质量谱，也就是质谱 (mass spectrum)。 质谱：按离子的质荷比的大小依次排列形成的图谱 质谱分析法：通过对被测样品离子的质荷比的测定来进行分析的一种分析方法，即通过样品的质谱和相关信息，可以得到样品的定性、定量分析结果 质谱检测不同于其他检测技术的特点 质谱是检测技术，不是分离技术，但却有分离功能，如何理解？ 质谱给出的响应信号是质荷比（m/z） 不同的化合物，会有不同的质荷比，所以其响应值是相互区分的 其他检测技术：同一瞬间的化合物的检测信号，是相互叠加的 质谱图相关概念 质谱（离子秤）的质荷比测定： 秤的核心 质谱的质量分析器 秤的荷载（量程） 质谱的质量数分析范围 秤的感度 质谱的质量数分辨率 （1）样品引入系统： 把分析样品导入离子源的装置 气质联用、液质联用系统的对比 2 GC-MS 电子轰击源，EI 或化学电离源，CI 化合物失去电子，形成分子离子，M+ 由于电子质量很小，约为中子，或质子质量的1/2000，所以M+≈分子量 LC-MS 大气压电离源，API 电喷雾电离 ESI 大气压化学电离 APCI 化合物结合溶液中的质子，形成加氢离子， [M+H]+ 所以， [M+H]+ ≈ 分子量+1 [M-H]- ≈ 分子量-1 大气压离子化技术 液质联用技术的离子源： —— 化合物由液体→气体离子的过程 两种主要类型: Electrospray Ionization —— ESI，电喷雾离子源 先电离，后气化 Atmospheric Chemical Pressure Ionization with Heated Nebulizer —— APCI，大气压化学电离源 先气化，后电离 ESI，电喷雾工作原理 APCI，大气压化学电离源工作原理 大气压离子化技术， 主要障碍： 1、能否把大量的溶剂除去并不使质谱仪受到污染 2、能否使被分析样品在温和条件下带上电荷得到分析而不被分解 离子化效率高低是影响分析灵敏度的主要因素 接口技术 将离子源产生的离子，尽可能多的引入质谱分析系统 有一定的抗污染能力 现行几种接口示意图： （4）质量分析器： 是质谱仪中将离子按质荷比分开的部分，离子通过分析器后，按不同质荷比(m/z)分开，将相同的M/Z离子聚焦在一起，组成质谱 四极杆，Quadrupole，Q 离子阱，Ion Trap，IT 飞行时间，Time Of Flight，TOF 傅立叶变换离子回旋共振，FT-ICR 四极杆质量分析器简介 四级杆的两个关键电压：RF、DC RF only： 离子全部通过 四极杆不能分辨，或“认识”m/z，可看作离子通道 RF + resolving DC：可选择、分辨离子 四极杆可以分辨出 m/z 相差 1Da 的质量数 m/z 与加在四极杆上的RF与DC的比值正相关 给定RF和DC，只有一种m/z的离子可以通过四极杆 根据RF和DC的不同，四极杆有两种工作方式 四极杆对离子的控制方式：控制RF/DC 两种工作方式： 固定RF和DC，只让一种质荷比的离子通过 扫描RF和DC，让离子按质荷比大小顺序通过 四极杆的分辨率与灵敏度的关系 四极杆的分辨率与质荷比的关系 串联四极杆技术 两个四极杆串联在一起 空间串联 扫描方式多样化 串联四极杆扫描方式 串联四极杆扫描方式 如何建立LC-MRM方法？ 以氯霉素为例 C11H12Cl2N2O5 1. 查阅资料、文献 待分析化合物的基本信息 分子式 利用质谱专业软件，计算化合物的单同位素（mono）分子量 待分析化合物的LCMSMS方法 离子化方式 母离子/子离子 如果文献中使用机型形同，MRM相应的参数也具有参考价值 Cone Voltage Collision Energy 确定母离子的相关参数 确定母离子的质荷比，至少准确到小数点后面第一位 “Ramp” 锥孔电压，优化母离子的信号强度，选择最佳锥孔电压 确定MRM方法 确定化合物的母离子/子离子对（MRM通道） 氯霉素特征MRM方法为： 321/152，用于定量分析 321/257，用于定性验