生物化学课件-酶.pptVIP

* （四）Ｋm值的测定 Lineweaver-Burk 林-贝氏图 Km的测定 双倒数作图法 Km Vmax [S] 1 1 1 v Vmax = ＋ · [S] 1 v 1 Vmax 1 Vmax Km 斜率＝ Km 1 － * 二、 [E]对酶作用的影响 当底物浓度足够大使酶饱和，则反应速度与酶浓度成正比 v = k [E] * 三、温度对酶活性的影响 双重作用: T↑，V ↑ T ↑，具活性的酶↓ 最适温度(optimum temperature)：酶促反应速度最快时的环境温度。它受 [S]、[E]、pH、反应时间等影响。 低温的应用 * 四、pH对酶作用的影响 最适pH受底物种类、浓度; 缓冲液种类、浓度; 酶纯度;反应温度、时间等影响。 例: AKP催化磷酸苯酯水解时 [s]为2.5×10-5 M，最适pH为 8.3 [s]为2.5×10-2 M，最适pH为10.0 pH 最适pH v * pH如何影响酶的活力？ 酶分子结构的稳定性 酶活性部位有关基团的解离 底物的解离 * 五、激活剂对酶作用的影响 激活剂(activator)：使酶由无活性变为有活性或使酶活性增加的物质。 无机离子 k+、Na+、Mg2+、Fe2+ 、Cu2+ 、Ca2+等 Cl－ 、 CN－、 I －、 PO4-3等 有机分子 金属螯合剂 EDTA 还原性有机物 GSH * 应用离子激活剂注意的问题： 激活剂对酶的作用有一定的选择性 离子之间有拮抗现象 激活剂浓度对其作用的影响 * 六、抑制剂对酶作用的影响 凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白变性的物质统称为酶的抑制剂。 区别于酶的变性 　　抑制剂对酶有一定选择性，而变性的因素对酶没有选择性。 * 不可逆抑制 可逆抑制 竞争性抑制 非竞争性抑制 反竞争性抑制 抑制作用的类型 E+I→ EI 共价结合 透析不能去掉I E + I ? EI 非共价、可逆结合 透析能去掉 I 恢复酶活性 * (一) 不可逆性抑制作用 E+I→ EI 共价结合 透析不能去掉I * （二） 可逆性抑制作用 竞争性抑制 非竞争性抑制 反竞争性抑制 * 类型 E + I ? EI 非共价、可逆结合 透析能去掉 I 恢复酶活性 * 1. 竞争性抑制 加大【S】可以减弱甚至消除抑制作用 抑制程度： 底物浓度 抑制剂浓度 * Km增大 Vmax不变 纵轴截距相等 横轴截距负值减小 斜率增大 竞争性抑制 * COOH COOH CH2 CH2 COOH COOH CH HC ＋ FADH2 ＋ FAD 琥珀酸脱氢酶 竞争性抑制剂 加大【S】可以减弱甚至消除抑制作用 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制 COOH COOH CH2 丙二酸 COOH COOH C=O CH2 草酰乙酸 COOH COOH CHOH CH2 苹果酸 * 对氨基苯磺酰胺 对氨基苯甲酸 竞争抑制叶酸合成酶 叶酸 谷氨酸 蝶呤 对氨基苯甲酸 人，畜禽能利用食物叶酸 细菌不能利用外源叶酸 * 2. 非竞争性抑制 加大【S】不能减弱抑制程度 底物 抑制剂 酶 * 横轴截距相等 纵轴截距增大 直线斜率增大 非竞争性抑制 Km不变 Vmax减小 * 3. 反竞争性抑制作用 抑制剂只能与酶 －底物复合物结 合，而不能与游 离酶结合。 * 反竞争性抑制作用 Km和V都减小 但是V/Km比值不变 * 可逆抑制的动力学比较 抑制类型 Vmax 表观Km 无抑制剂 Vmax Km 竞争性抑制 不变 变大 非竞争性抑制 变小 不变 反竞争性抑制 变小 变小 * 竞争性I 1/v 1/[S] 无抑制剂 Vmax 1 Km 1 - 非竞争性I 反竞争性I 各种抑制类型的Lineweaver-Burk图 * （1）药物作用机理和抑制剂型药物的设计与开发。 （2）了解生物体的代谢途径，进行人为调控或代谢控制发酵。 （3）通过抑制剂试验研究酶活性中心的构象及其化学功能基团，不仅可以设计药物，而且也是酶工程和化学修饰酶、酶工业的基础。 研究抑制剂对酶的作用有重大的意义： * 第五节 几种重要的调节酶 一、别构酶 二、同工酶 三、共价调节酶 四、酶原的激活 五、诱导酶 * 概念： 有些酶分子表面除了具有活性中心外，还