哈尔滨工程大学《分子生物学》课件-第5章转录.pptVIP

三、tRNA的转录后处理 原核生物的tRNA基因的转录单元大多数是多基因的。 同一种tRNA的几个基因拷贝可以转录在一条RNA中，不同的tRNA也可以转录在一条RNA中，还有的tRNA与rRNA组成转录单元。 以大肠杆菌的tRNATyr1为例。它携带酪氨酸的tRNA，识别的密码子为GAU。这个分子含有85个核苷酸，在大肠杆菌的DNA中有两个基因拷贝，每个基因是350个核苷酸，两个基因间有一段200bP的间隔子。两个基因转录成一条RNA。 tRNATyr1转录后处理过程主要有五步 （1）一种能识别发卡结构Ⅰ的内切核酸酶在箭头所指处切断；（2）RNAaseD识别CCA末端，一个一个切除7个核苷酸。生成的 分子称为前tRNA。 （3）RNAaseP在箭 头所指处切断，负责 5’- P末端的处理； （4）RNAaseD除去 3’末端的二个核苷酸。 （5）有6个碱基通 过专一性酶处理变为 异常碱基。 tRNA的加工酶主要包括tRNA核苷酸转移酶，RNAaseP、RNAaseD、RNAaseⅢ及RNAaseP4。 （1） tRNA核苷酸转移酶：能特异地以ATP和CTP为前体催化tRNA3’末端的CCA的生成。tRNA基因有两种类型，一种是有CCA序列（Ⅰ型），一种是没有CCA序列（Ⅱ型）。成熟的有功能的tRNA均有CCA3’-OH末端，这是tRNA结合并携带氨基酸的功能所必须的。 原核生物的tRNA绝大多数为Ⅰ型，少数噬菌体为Ⅱ型；真核生物均为Ⅱ型。 tRNA核苷酸转移酶反应是专一的，当tRNA缺少CCA末端时，总是生成CCA末端。此酶没有种族的特异性，不同种类的酶与tRNA配合都能添加CCA末端。 （2）RNAaseP ：是一种内切酶。所有的tRNA5’末端都由该酶产生。大肠杆菌的RNAaseP温度敏感突变体在非许可温度时使40多种tRNA的前体发生积累。该酶是一种核蛋白，由两部分组成。这两部分在不同的物种之间是非常保守的。 各种tRNA前体分子与RNAaseP反应，都能获得该tRNA正确的5’端序列。 RNAaseP识别的tRNA的空间构象，而不是几个核苷酸序列。各种tRNA都有其保守的核苷酸，以维持tRNA的空间构象。 （3） RNAaseD ：为外切核酸酶。作用于tRNA3’末端多余的核苷酸，直到CCA序列为止。其作用是一个一个CCA外围切除核苷酸。 第八节 转录后处理（三）内元的去除——RNA的拼接 两类终止子的不同点 不依赖ρ因子的终止子的回纹序列中富含GC碱基对，在回纹的下游由常有6~8个AT碱基对。 依赖于ρ因子的终止子中回纹序列的GC对含量较少，在回纹的下游也没有固定的特征。 强终止子的结构 …NNAAGCGCCGNNNCCGGCGCTTTTTTNNN… …NNTTCGCGGCNNNGGCCGCGAAAAAANNN… DNA …NNAAGCGCCGNNNCCGGCGCUUUUUUNNN… RNA N N N N N G ·C C ·G C ·G G ·C C ·G G ·C C ·U …NNNNC ·U UUUU…-OH 3’ 强终止子结构的模式图 强终止子是如何实现终止？ RNA聚合酶在延长合成RNA的速度是不恒定的。在通过一段富含GC对的序列之后约8~10碱基会出现一次延宕。终止子中回纹序列在DNA中形成十字形结构的可能性很小，因为从能量上来说是不利的。而且，RNA聚合酶已经转录了回纹序列。 可能是转录出来的RNA形成二级结构，即柄-噜噗结构，由称发卡结构。这样的发卡结构可能与RNA聚合酶的某种特定的空间结构相嵌合，阻碍了RNA链从