DB15T 1646-2019向日葵抗菌核病（茎基腐）室内鉴定技术规程.pdfVIP

ICS 65.020.20 B 16 DB15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1646-2019 向日葵抗菌核病（茎基腐） 室内鉴定技术规程 Technical Regulation For Indoor Identification Of Sunflower Resistance To White Rot (Crown Rot) 2019-05-20 发布 2019 -08-20 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由内蒙古农业大学提出。 本标准由内蒙自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC 20）归口。 本标准起草单位：内蒙古农业大学。 本标准主要起草人：张之为、赵君、张键、贾瑞芳、王玉杰。 向日葵抗菌核病（茎基腐）室内鉴定技术规程 1 范围 本规程规定了室内条件下向日葵抗（耐）菌核病的鉴定技术规程。 本标准适用于向日葵品种（系）对菌核病抗性水平的鉴定。 2 接种菌株选择 采用从内蒙古向日葵主栽区地块中发病株上分离纯化并鉴定的核盘菌菌株（Sclerotinia sclerotiorum），致病力处于中等水平。 3 培养基配制 马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯 200 g、葡萄糖 20 g、琼脂粉 13 g、用蒸馏水定容至1000 mL。 Minimal-medium （MM）培养基: NaOH 1 g、DL-malic acid 3 g、NH NO 2 g、MgSO •7H O 0.1 g、 4 3 4 2 Bacto-agar 39 g、用蒸馏水定容至1000mL。 4 病原菌培养 将保存在甘油中的核盘菌菌丝体接种在PDA平板上，置于22 ℃培养箱中活化培养。待菌落形成后， 在菌落边缘打取直径为4 mm菌丝块接于新的PDA培养基中央进行培养。2 d～3 d后，打取菌落边缘的菌 丝块接种到MM培养基进行培养。待菌落长到培养皿直径的 80 % 时，用打孔器在菌落边缘打取菌丝块（直 径4 mm），用于接种。 5 对照品种选择 分别以高抗菌核病的品种法国1号和高感品种新葵杂5号作为接种的对照。 6 鉴定材料准备 将向日葵种子播种在装有无菌土的营养钵（13 cm×13 cm）中，每个品种播种5钵，每钵播种5粒， 置于25 ℃,16 h光照/8 h黑暗条件下，待幼苗生长到6～8片真叶时，用于离体叶片和茎秆接种的鉴定。 7 抗性鉴定 7.1 同时采用离体叶片和茎秆接种法进行品种抗性鉴定，取一致性结果作为抗性水平的最终鉴定结果。 7.2 离体叶片接种法 取3～4片向日葵叶片，用水冲洗干净，滤纸吸干叶片的多余水分。将叶片背面朝上均匀的放在铺有 滤纸的磁盘内，将菌块的菌丝面朝下接种在叶片主脉的右侧，在叶脉的左侧接种未接菌的MM培养基块作 为接种对照。每个品种接种5个叶片，每个叶片接种1个菌丝块，3次重复。用保鲜膜封住磁盘，于22 ℃ 光照培养箱中观测病斑形成。当感病品种病斑直径达到2.0 cm，抗病品种病斑直径达到0.5 cm后，用十 字交叉法测定叶片病斑直径，计算平均值。按照表1的分级标准确定供试向日葵品种对菌核病的抗性水 平。 表1 向日葵离体叶片对菌核病抗性水平的鉴定标准 抗性型 病斑大小范围 X (cm) 免疫 X=0.00