14 病毒的血凝及血凝抑制试验《动物微生物及免疫基础》教学课件.pptxVIP

动物微生物及免疫基础实训课;主要内容;1.实验原理 ;;;;;血凝（HA）试验;血凝抑制（HI）试验;血凝及血凝抑制现象的应用;2、目的要求;3、仪器及材料;4.1 1%鸡红细胞悬液制备;;;;4.2 病毒的血凝实验（HA） 以检查新城疫病毒为例，在96孔“V”形微量反应板中进行 1. 取洁净96孔“V”形微量反应板1块，用微量移液器从左至右各孔加25μL生理盐水。 2.病毒液的倍比稀释 换一吸头吸取25μl 新城疫病毒原液，加于第1孔的生理盐水中，并用移液器吹打3～5次使液体混合均匀， 然后取25μl 移入第2孔，混匀后取25μl 移入第3孔，依次倍比稀释到第11孔，第11孔中液体混匀后从中取出25μl 弃去，第12孔不加病毒液，作对照。稀释后病毒稀释度为第1孔1:2，第2孔1：4，第3孔1:8……，最后1孔为对照。;4. 每孔加1%红细胞悬液 换一吸头吸取1%红细胞悬液依次加入1 ～ 12孔中，每孔加25μl 。加样完毕，将反应板置于微型振荡器上振荡混匀1min。 5.反应：振荡混匀后置37℃温箱反应15min，生理盐水对照孔的红细胞成明显纽扣状沉到孔底时观察。 ;5、HA结果观察判定（反应板倾斜45度观察底部）;血凝价常用nlog2或1：2n表示。;;4.4 病毒的血凝抑制实验（HI） 1. 在96孔微量反应板上进行，用固定病毒稀释血清的方法，自第1孔至第11孔各加25μL生理盐水。 2.待检血清的倍比稀释 第１孔加待检血清25μL，吹吸混合均匀，吸25μL至第2孔，依此倍比稀释至第10孔，吸弃25μL，稀释度分别为：1:2、1:4、1:8 …… ，第11孔为病毒对照，第12孔为生理盐水对照。;3、自第1孔至11孔，每孔加25μL4HAU病毒液，振荡混合均匀，置37℃温箱中作用15min 。 4、再以微量吸液器每孔加1％鸡红细胞悬液25μL，其中第11孔为4单位新城疫病毒液对照 5、反应 振荡混合均匀（1min），置37℃温箱中作用15min。当生理盐水对照孔红细胞呈显著纽扣状时判定结果。 ;5、结果判定（反应板倾斜45度观察底部）;5、结果判定;;;注意事项;最后加PBS和红细胞悬液要倒加，悬空加 可以悬空加液的话也可以正向加，主要是为了防止你的枪头挨着稀释好的病毒液，造成结果不准确。如果是反向加，即使是你枪头碰着液面了，也不要紧，因为从低倍数到高倍数稀释，??没有很大影响的。;7、作业