《遗传学实验》教学课件合集.pptx

植物有丝分裂的制片与观察实验目的掌握植物根尖细胞有丝分裂的制片技术观察植物细胞有丝分裂过程中染色体的形态特征，找出有丝分裂各个时期的代表性细胞，总结有丝分裂过程中染色体的动态变化。实验材料及流程1.根冠2.分生区3.伸长区?大蒜 2n=16生根-取材-固定-解离-漂洗-染色-压片-镜检水培生根（已完成）取材（已完成）根尖部位 1.5-2cm 长固定（已完成）目的：终止细胞生长过程及一切生理生化反应，维持细胞结构不变方法：Carnoy固定剂（3份95%乙醇，1份乙酸），处理2-4h原理：迅速穿透细胞致死，乙醇-脱水收缩 乙酸-膨胀解离目的：破坏细胞间果胶质和纤维素，使细胞容易散开方法：1M HCl 烧杯60℃预热 处理5min注意：每组统一用纱布取根尖样本，流水漂洗数秒，转移样本到烧杯内并计时漂洗目的：去除残留的盐酸，恢复低渗环境方法：纱布内用蒸馏水或清水漂洗干净，之后在平皿中浸泡待用剥离分生组织1 截取3mm左右根尖区域，置于载玻片上2滤纸吸干多余水分后用解剖针去除半透明状非分生组织，留取白色分生组织注意：宁滥毋缺染色染色液：石碳酸品红（卡宝品红），染色质特异染料步骤：1 滴加1-2滴染色液2 染色5min压片单侧慢放盖玻片（领取）滤纸吸干多余液体镊子轻敲使细胞分散如镜检发现细胞分散不完全可重复按压细胞镜检10倍或4倍镜锁定目标细胞40倍镜观察细节并绘图光栅、光源、镜头洁净度、细胞分散度、使用记录各个时期细胞实物图及手绘图间期前期中期末期后期前中期注意事项操作盐酸和染液时要小心不要接触皮肤，不要溅到实验台或显微镜上酸解时间不要过长压片不要用力太猛显微镜使用规范实验报告要求课上完成实验记录（实验步骤，现象），教师签字课后补充完成全部实验报告（目的，原理，结果，讨论等其他细节）实验结果的要求：每个时期的细胞图片（照片或手绘），各时期特点讨论部分：针对实验过程细节及个人实验结果自由讨论、禁止抄袭！下次课统一由班长上交Thank You !果蝇唾液腺染色体制片与观察实验目的掌握果蝇唾液腺染色体的制片技术观察唾腺染色体的形态特点实验材料及流程果蝇三龄幼虫 melanogaster 2n=8 virilis 2n=12流程：剥离唾液腺-解离-染色-压片-镜检解剖幼虫工具：镊子、解剖针生理盐水(0.7% NaCl)中操作、保存。注意液体量的控制解剖幼虫-拉断唾腺位置：头部两侧、位置在虫体的1/3-1/4两根解剖针的落点：近头端口器1/3-1/2处口器处解剖针平稳前移，身体破裂，一部分器官随口器牵拉而出，另一解剖针向前滚动挤出剩余器官。解剖幼虫-找到唾液腺4倍镜下寻找唾液腺（光圈10，淡黄色条状）对比肉眼观察，锁定唾腺目标，透明条状，倒像体视镜下唾腺透明度很高不利于寻找解剖幼虫-剥离唾液腺体式镜下剥离唾液腺（肉眼辨认也可）解剖针定期引流，维持湿环境体视显微镜 *双物镜立体视觉正像超长焦距放大倍数连续调节滤纸吸干液体-换液一定注意保护样本，不要将其吸到滤纸上液体较多时滤纸离样本远一点，随着液体减少再逐渐靠近样本解离-水洗-染色 1M 盐酸 室温解离 8-10 min用1-2滴生理盐水清洗样本 3-5次1-2滴石碳酸品红染色8min（只可4倍镜观察） 压片盖上盖玻片（避免气泡）解剖针轻敲样本正上方使组织细胞分散，倒扣在纸上用拇指大力按压使细胞膜破裂，细胞质和染色体散开。滤纸吸干多余染液镜检10倍镜下找到细胞40倍镜下观察染色体光圈、光源、镜头洁净度多线染色体形态实验报告要求课上完成实验记录（实验步骤，现象），教师签字课后补充完成全部实验报告（目的，原理，结果，讨论等其他细节）实验结果的要求：染色体臂分散的图片（照片或手绘），形态特点讨论部分：针对实验过程细节及个人实验结果自由讨论、禁止抄袭！下次课统一由班长上交Thank You !小鼠骨髓染色体制备与观察实验目的掌握动物骨髓细胞染色体制片技术观察小鼠中期染色体的形态特征并对染色体计数 实验材料及流程小鼠 2n=40秋水仙素处理-收集骨髓细胞-低渗处理-固定-滴片-染色-水洗-镜检秋水仙素处理（已完成）目的：抑制纺锤丝形成，增加中期分裂相细胞的比例方法：腹腔注射0.01%秋水仙素溶液 0.5ml 等待2-4h处死每四人领取一只小鼠抓住小鼠尾巴将其转移到实验台上颈椎脱臼法：一手按住鼠头，另一手抓住鼠尾靠近根部用力向后拉。将脊髓与脑髓拉断。注意小鼠咬手，缓慢加力解剖 每人一节腿骨剪去腿部附近皮毛，取出股骨胫骨，剃去周围肌肉组织。收集骨髓细胞剪去骨两端，注射器吸生理盐水（0.85% NaCl溶液） ，针头插入骨腔反复冲洗几次，用1.5ml离心管收集骨髓细胞。不要多次重复吸取含有细胞的生理盐水，总体积不要超过1.5ml离心离心条件：2000rpm 5min注意用相同溶液配平用注射器小心吸