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农学考研农学生化冲刺班讲义A本第1页/共73页第2页/共73页考研农学冲刺班生物化学第3页/共73页复习的原则：总体把握理解原理注意细节融会贯通第4页/共73页第二章蛋白质化学——复习要点结构（氨基酸/蛋白质）性质如何用结构解释性质，或：特定的性质与何种结构有关。功能结构与功能密切相关，特定的功能必然具有特定的结构。第5页/共73页基本结构蛋白质中的常见氨基酸缩写分类酸碱性质立体化学紫外吸收化学反应性质第二章蛋白质化学——蛋白质氨基酸第6页/共73页第二章蛋白质化学——肽肽键氨基酸残基 肽链的方向天然多肽谷胱甘肽第7页/共73页蛋白质的结构层次（6个层次）蛋白质结构与功能的关系一级结构与功能的关系（Cty c, Hb）空间结构与功能的关系（RNase, Hb）蛋白质蛋白质的性质蛋白质的胶体性质；紫外吸收（280nm）；变性与复性；变性蛋白质的特性；蛋白质的显色反应（定量测定）蛋白质的纯化重点：电泳、层析、离心第二章蛋白质化学——蛋白质第8页/共73页例题与解析水溶液中（pH7.0），非极性氨基酸一般处于球状蛋白质分子的内部，而极性氨基酸一般处于球状分子的表面。问： ⑴ 下列氨基酸中，哪些最有可能处于分子内部？哪些最有可能处于分子表面？ Val、Pro、Phe、Asp、Lys、Ile、His。 ⑵ 为什么Gly和Ala通常既可能处于分子内部也可能处于分子表面？答： （1）Val、Pro、Phe、Ile都是疏水氨基酸，一般处于球状蛋白质分子的内部。Asp、Lys、His是极性氨基酸，一般处于分子的表面。（2）Gly和Ala的侧链很小，不足以产生较强的疏水作用，因此可以处于分子的内部和表面。第9页/共73页一种蛋白质的相对分子质量为3 600（氨基酸残基的平均分子量为120）。请问：1、如果这种蛋白质是一条连续的α-螺旋，它是多长？2、如果这种蛋白质是一条单股的β-折叠，它是多长？ 答： 蛋白质中氨基酸的数目：3 600÷120=30（个氨基酸）α-螺旋中2个氨基酸的距离为0.15nm；平行β-折叠股中2个氨基酸的距离为0.325nm，反平行β-折叠股中2个氨基酸的距离为0.35nm。所以：1、0.15nm×30=4.5nm2、0.325nm×30=9.75nm（平行） 0.35nm×30=10.5nm（反平行）第10页/共73页简述蛋白质的一级结构及其与生物进化的关系。答：一级结构是蛋白质多肽链中的氨基酸序列。不同物种的亲缘关系越远，同源蛋白质一级结构的差异越大。亲缘关系越近，同源蛋白质一级结构的差异越小。与功能密切相关的氨基酸残基不变，与进化相关的氨基酸残基可变。第11页/共73页第三章 核酸化学——复习要点DNA结构、性质RNA结构实验技术DNA测序；PCR第12页/共73页Chargaff 规则DNA的一级结构（定义）DNA的结构DNA的双螺旋结构要点、参数及计算、稳定双螺旋的力DNA双螺旋结构的多态性 （A-, B-, Z-DNA ）DNA的超螺旋结构（定义）第三章 核酸化学——DNA的结构第13页/共73页一级结构、二级结构（茎环结构）tRNA的结构一级结构、二级结构（三叶草形、四环四臂）、三级结构（倒L形）RNA的结构rRNA的结构核糖体与相应的rRNA；真核；原核mRNA的结构原核以及真核mRNA的结构；二者结构的区别第三章 核酸化学——RNA的结构第14页/共73页核酸的变性增色效应；Tm值和与Tm值有关的因素核酸的性质核酸的复性减色效应、退火、核酸的分子杂交性质纯化DNA测序PCR原理第三章 核酸化学——核酸的性质第15页/共73页第三章 核酸化学——核酸的性质与纯化性质：溶解度、沉降、粘度紫外吸收（260nm）纯化：除去蛋白质；避免大分子降解DNA与蛋白质形成的核蛋白易溶于高盐溶液。RNA与蛋白质形成的核蛋白易溶于低盐溶液，避免RNase的污染。第16页/共73页DNA序列测定（双脱氧法）反应需要引物、模板、dNTP、2’，3’-ddNTP 、DNA聚合酶。dNTP是合成DNA 的原料ddNTP（双脱氧核苷三磷酸）使 DNA的延长随机终止。用32P标记DNA引物的5’端；反应体系分成4组，每组加入dNTP和一种2’，3’-ddNTP ，合成DNA；电泳分离，放射自显影；确定核苷酸的排列顺序。第17页/共73页被测序列模板链DNA序列测定（双脱氧法）5’-GATTCGAGCTGA-3’3’-CTAAGCTCGACT-5’第18页/共73页72℃延伸模板DNA94℃变性 1个 循环52℃退火引物（正向）引物（反向）PCR原理Taq DNA聚合酶第19页/共73页例题与解析简述DNA双螺旋结构的基本特征。答案见教科书或讲义。简述tRNA结构的基本特征答案应包括tRNA的一级、二级、三级结构，具体内容见教科书或讲义。