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第1页/共164页农业微生物学第2页/共164页第二节 微生物的合成代谢生物固氮 是指大气中的分子氮通过微生物固氮酶的催化而还原为氨的过程, 生物界中只有原核生物才具有固氮能力具有固氮作用的微生物近五十个属，包括细菌、放线菌和蓝细菌 根据固氮微生物与高等植物以及其它生物的关系，可以把它们分为三大类：自生固氮体系，共生固氮体系和联合固氮体系 微生物能够在常温常压条件下固氨，关键是靠固氮酶的催化作用 第3页/共164页第二节 微生物的合成代谢共生固氮体系 根瘤菌（Rhizobium）与豆科植物共生；弗兰克氏菌（Frankia）与非豆科树木共生；蓝细菌（cyanobacteria）与某些植物共生；蓝细菌与某些真菌共生第4页/共164页第二节 微生物的合成代谢自生固氮体系 好氧自生固氮M 固氮单胞菌属 （Azotobacter固氮菌属，Azotomonas 固氮单胞菌属，etc）厌氧自生固氮M （Clostridium 梭菌属 ）兼性厌氧自生固氮M（Bacillus，Klebsiella，etc）大多数光合M（蓝细菌，光合细菌）第5页/共164页第二节 微生物的合成代谢联合固氮体系 不生成共生固氮特殊结构；有较强的寄主专一性雀稗固氮菌（Azotobacter paspali）与雀稗根系形成联合 第6页/共164页第二节 微生物的合成代谢固氮机制 N2 + 8e- + 8H+ + nATP（固氮酶Mg2+）2NH3 + H2 + nADP + nPi 固氮反应的必要条件 ATP，e-、H+及其载体，固氮酶，N2，Mg2+，厌氧环境 固氮酶包括2种组分 组分I（P1）: 真正的固氮酶，又称钼铁蛋白（MoFe），由4个亚基组成。组分II（P2）: 实际上是一种固氮酶还原酶，又称铁蛋白Fe），由2个亚基组成 第7页/共164页微生物的生长细胞生长的标志：外观上是细胞由小长大包括： 染色体（或DNA）的复制、 核糖体的生物合成、 线粒体的生物合成、 细胞壁的生物合成等第8页/共164页微生物的生长Individual Growth and Synchronous Growth of Microorganisms Synchronous Growth 同步生长使培养基中细菌同时分裂，处于相同的生长阶段（处于分裂步调一致的生长状态）叫同步生长。环境条件诱导法机械筛选法其它方法第9页/共164页环境条件控制法温度调节法培养基成分控制 控制限制因子的量 或添加某些抑制剂（氯霉素抑制菌体蛋白合成）其它方法 用交替见光和黑暗处理光合细菌缺点： 打乱细胞原有的正常代谢。第10页/共164页第一节微生物生长及测定细菌的群体及生长曲线 细菌的生长曲线 第11页/共164页细菌生长曲线的测定分批培养（单批培养，密闭培养）曲线的测定：液体 将少量细菌接种到一恒定容积的新鲜液体培养基中，在适宜条件下培养，定时取样测定细胞密度，以活细胞数的对数对培养时间所作出的曲线称为生长曲线。 微生物的典型生长曲线：延滞期、指数期、稳定期、衰亡期 微生物的非典型生长曲线：延滞期、快速生长期、生长衰退期第12页/共164页第一节微生物生长及测定细菌的生长曲线延滞期(适应期) 在延滞期,细菌的增殖率与死亡率相等，均为零；菌数几乎不增加，曲线平稳指数期, 又称对数期 (logarithmic phase) 细胞增长以指数式进行的快速生长繁殖期称为指数期，也称对数期 第13页/共164页Lag phase 调整期、适应期、停滞期细胞生理特点： 分裂迟缓、菌体大、DNA含量高代谢活跃出现的原因： 为了调整代谢（需要合成多种酶，辅酶和某些中间代谢产物）影响因素： 菌种的遗传性、菌龄、接种量、及移种前后所处的环境条件等。缩短意义：可以缩短生产周期，提高设备利用率缩短措施： 增加接种量 调整营养成分 采用对数期的种子接种 选用繁殖快的菌种第14页/共164页延滞期延滞期特点：生长速率等于零细胞合成新的成分微生物细胞特点：补充消耗的材料适应新的培养基或别的培养条件细胞形态变大或变长对外界不良环境敏感。第15页/共164页影响延滞期长短的因素与实践意义 接种龄对数期“种子”，延滞期较短；延滞期或衰亡期“种子”,延滞期较长接种量接种量大，延滞期较短；接种量小，延滞期较长；培养基成分培养基成分丰富的，延滞期较短；培养基成分与种子培养基一致,延滞期较短第16页/共164页延滞期出现原因 把细菌接种到新鲜的培养基中培养时，并不立即进行分裂繁殖，细菌增殖数为０，这时需要合成多种酶，辅酶和某些中间代谢产物，要经过一个调整和适应过程 。Microbiology第17页/共164页Log Phase (指数期）细胞数呈几何级数增加细胞的生理特点： 细胞生长速率R最大， 均衡生长：个体形态、化学组成和生理特性等均