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3,5-二硝基水杨酸比色定糖法实验步骤
一、样品中还原糖提取和总糖水解
(一) 样品中还原糖的提取
1、准确称取1 g 样品放入250 ml 三角瓶内，加入85%乙醇溶液25 ml ，混匀；
2 、在50℃恒温水浴中保温30 min 后，过滤；
3、将滤渣用85%乙醇再提取2 次，每次5 ml，将滤液合并；
4 、蒸去乙醇，降至室温；
5、加少量水，完全移入100 ml 容量瓶中，用水稀释至刻度，备用。
（二）样品中多糖的水解与提取
1、准确称取样品0.5 g ，放入大试管中；
2 、加入7.5 ml 蒸馏水混匀，再加入6 M 盐酸5 ml，混匀；
3、在沸水浴中加热0.5 h，取出少量，用碘化钾-碘溶液检查水解程度 （若已水解，则不呈蓝色），若已水解，则冷却；
4 、加入1 滴酚酞指示剂，10%的NaOH 溶液中和至微红色 （酚酞变色范围pH 8.2 ～10.0），过滤；
5、将滤液定容至50 ml 的容量瓶中，再稀释10 倍（取其中5 ml 定容到50 ml 容量瓶），测定。
二、DNS 定糖
1、葡萄糖标准曲线绘制：取7 支大试管，分别按下表顺序加入各种试剂并混匀：
管号 0 1 2 3 4 5 6
葡萄糖液（ml ）（1mg/ml) 0 0.05 0.1 0. 15 0.2 0.25 0.3
蒸馏水(ml) 0.5 0.45 0.4 0.35 0.3 0.25 0.2
DNS 试剂(ml) 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
含糖量(mg) 0 0.05 0.1 0. 15 0.2 0.25 0.3
混匀，沸水浴加热5 min ，取出后立即冷却至室温
蒸馏水(ml) 5 5 5 5 5 5 5
A520 值 0
2 样品检测
管号 空白 还原糖 总糖
试剂 0 1 2 3 4
样品量(ml) 0 0.25 0.25 0.25 0.25
H O (ml) 0.5 0.25 0.25 0.25 0.25
2
DNS (ml) 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
混匀，沸水浴加热5 min ，取出后立即冷却至室温
H O (ml) 5 5 5 5 5
2
A520 值 0
三、糖含量计算
计算还原糖含量 （%
网络工程师持证人
本人已从事浙江省工程咨询5年，对浙江省内工程信息非常熟悉，可获取新建工程相关联系人、设计院、业主等关键信息。另外从事楼宇自控专业已10年，考取了一建二建等资格证书，有关考试方面的问题（考试心得、方法、学习资料等）都欢饮来咨询交流。
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