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DAC柱分离的使用 一、 色谱知识简介 二、 DAC简介及相关配置介绍 三、 装柱、拆柱培训 四、 常规制备操作培训 五、 注意事项与日常维护 色谱法是利用不同性质的物质在不相混溶的两相中分配系数，吸附解吸附或其它性能不同而被分离。 TLCLCHPLCGC薄层色谱开管色谱高效液相色谱气相色谱Chromatography 高效液相色谱分析定性 定量 确定样品中化合物制备提取分离纯化 混合物中有价值的化合物 而不是传统意义上的分析仪器常见的分离方式：蒸馏、离心、电泳、过滤、超滤重结晶等等色谱是其中一种分离工具 高效液相色谱分析制备超高效液相（UPLC）动态轴向压缩（DAC)模拟移动床（SMB） 什么是高压制备色谱？高压制备色谱与经典色谱并没有本质的区别，不同点是高压制备色谱与传统经典的色谱相比，有较高的效率，并且实现了自动化操作；在仪器方面，它采用了高压输液泵送流动相，同时在色谱柱后加有检测器，对色谱柱流出物进行连续检测。目前高压制备色谱总的来讲有如下几个特点：1.柱长较短 2.内径大 3.流速高高压制备色谱，有时又称为高效制备色谱（High performance preparative liquid chromatography)主要进口品牌：Gilson，USAVarian，USAWaters，USAShimadzu，Japan 分析制备放大优化分析方法的选择性在分析柱上进行超量载样放大到制备柱制备相关技术 1）制备的目的是在一次操作中尽可能地多上样，所以，首先得在分析柱上实现超载，否则，分析柱分离得再漂亮，再在制备柱中线性放大时就因为成本不合理而被无情地否决。2）制备的目的是分离你所关心的组分，只要它能与其它杂质分离的好就行了，所以不要希望在分析柱上先得到所有组分的基线分离，完全没有必要！设计梯度时只需对目的物前后5-10%梯度的范围进行精细分离。3）制备中常常因为超载而无法使目的物与邻近杂质间达到基线分离，可以采用分段收集的方法得到指定纯度的目的物，要求越纯，单次操作的得率也越低。4）制备中因为目的物来之不易，常常需要将纯度不合格得目的物重新上柱循环，一般只需稀释1-2倍就可以了。由于重新上柱是会增加成本的，所以超载的量要平衡单次操作的纯品得量和效益与返工成本，以单位纯品数量进行成本核算，以优化最佳上样量。 一、 色谱知识简介 二、 DAC简介及相关配置介绍 三、 装柱、拆柱培训 四、 常规制备操作培训 五、 注意事项与日常维护 DAC色谱柱简介动态轴向压缩柱（dynamic axial compression，简称DAC）采用活塞装柱（匀浆填充），在使用过程中始终保持填料处于压缩状态以确保其稳定性。动态轴向压缩柱在使用过程中活塞始终产生一定的压力压缩填料，消除产生的死体积。其原理是通过活塞的上下运动来装柱、维持柱压和卸柱，活塞周边安装了特殊设计的密封圈能容许活塞在色谱柱内壁上下自由滑动，同时又能保持高的密封性。活塞运动和压力维持依靠由气压控制的液压，并通过设计使液压可以长期稳定在需要的压力数值。 活塞与顶端法兰均配有多孔不锈钢筛板及能使样品及流动相在柱截面上均匀分布的分配器。液流分配器保证了大量样品尽可能地瞬时分散在柱截面上，进而快速均匀进入柱床，避免了柱中心样品局部过浓的现象，保证了色谱柱的分离效果。填料颗粒的性质、匀浆溶剂的性质、轴向压缩力的强度等，对DAC制备柱的填充密度及柱效均有影响。 配置介绍：本系统由P6000高压输液泵、DAC100、KNAUER Detector2550、KNAUER Valve drive V 2.1S、 Clarity色谱工作站等组成。 泵壳体泵头压力传感器 建立新文档打开现有文档显示报告打印栏打印报告设置项目目录设置用户选项输出数据设置后运行单次分析序列分析（配备自动进样器）色谱图窗口积分计算当前运行的方法信息采集数据“仪器监视窗口、采集、测量及控制”方法菜单校准窗口创建报告输入用户名后点击“确定”即可打开工作站方法模板界面， 一、 色谱知识简介 二、 DAC简介及相关配置介绍 三、 装柱、拆柱培训 四、 常规制备操作培训 五、 注意事项与日常维护 色谱柱装柱过程1．100DAC柱的匀浆制作a)先倒匀浆瓶内加入干填料（1200g）b) 再逐步加入2000mL异丙醇于匀浆瓶内c) 边加边搅拌d) 再将剩下的400mL异丙醇加入瓶内，带清洗瓶壁，充分搅拌均匀。 2匀浆溶液的转移和色谱柱柱管内壁的清洗a) 将搅拌均匀的匀浆液超声脱气后，转移至色谱柱柱管内，将匀浆液全部装入柱内.b) 用装有异丙醇的洗瓶，淋洗色谱柱柱管内侧，使柱管内侧无填料附着。 3运行设备，活塞下移，排气泡。a)