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BMP-2基因治疗的组织工程骨联合显微外科血供重建修复兔桡骨缺损的实验研究 BMP-2 gene enhanced tissue engineering bone and united with microsurgery techniques for repairing segmental radial bone defect in rabbits Research Background骨缺损的治疗，在临床上一直是一个棘手的难题。最近，以细胞移植与生物材料相结合的骨组织工程及以重组DNA为核心的基因工程技术的联合应用成为广泛研究的热点，为骨缺损修复带来了希望。这两种新兴技术有机结合的切入点是利用体外基因治疗策略，将骨生长因子基因导入组织工程骨的种子细胞，使这些细胞在体内增殖、分化成骨的同时，持续分泌生长因子促进骨愈合，以解决生长因子外源性植入效价低，持续时间短等不足。 2 Research Background在众多骨生长因子中，BMP-2被公认为是目前最强的骨诱导因子。通过多种属的动物实验, 国外众多学者已经证实使用BMP-2基因治疗方法，均可获得很好的促进骨缺损修复的效果。 缺点和不足：血运问题没有得到有效解决。 ①临床上骨缺损、骨不连往往血运较差； ②大块组织工程骨体内存活也需要充足的血运提供养分； 因此需研究组织工程骨的快速建立血管化技术。 3 Objective and Significance 通过显微外科技术提供血运，联合BMP-2基因治疗方法，观察协同因素对促进新骨形成和血管化的作用，探讨桥接骨缺损的最佳途径，为BMP-2基因治疗的组织工程骨应用于临床奠定实验基础。 4 技术路线 (Research Protocol)5 2.2 BMP-2 expression in hBMSC after infection6therapeutic engineering boneChapter 1 Constructed BMP-2 gene 组织工程骨体外构建第一章 BMP-2基因治疗的3.1 BMP-2 promote proliferation and conversion of hBMSC7 therapeutic engineering boneChapter 1 Constructed BMP-2 gene3.2 BMP-2 promote VEGF expression8 4.3 Attachment and growth of transduced cells on BCB9therapeutic engineering boneChapter 1 Constructed BMP-2 gene 组织工程骨体外构建第一章 BMP-2基因治疗的4.4 BMP-2 expression in condition of scaffold10 第二部分 体内实验Ectopic and orthotopic bone formation in nude mice and rabbits 两种动物模型： 转基因hBMSC在裸鼠体内异位成骨 转基因rBMSC自体移植修复兔桡骨缺损11 2.1 hBMSC keeping to live and continually express exogenous gene in vivo 12工程骨在裸鼠背部异位成骨第二章 BMP-2基因治疗的组织 分组：BALB/C裸鼠10只，①BMP-2基因转染细胞＋BCB；②未转染细胞＋重组BMP-2蛋白＋BCB ；③对照基因转染细胞＋BCB ；④未转染细胞＋BCB；⑤单纯BCB，手术植入裸鼠背部皮下，每组4枚，分4周和8周取材。 Nude mice by BCB with BMP-2 geneChapter 2. Ectopic bone formation in 13 2.3 Ultrastructure observation of new formed bone by SEM 14Nude mice by BCB with BMP-2 geneChapter 2. Ectopic bone formation in 2.4 B