微生物的诱变育种.pptVIP

第一页，共二十三页，2022年，8月28日 一、诱变育种中的几个原则 指利用物理或化学诱变剂处理微生物群体细胞，促进其突变率显著提高，然后设法从中选取少数符合育种目的的突变株。 2个主要环节： 诱变（随机） 选用合适的诱变剂和诱变剂量处理大量均匀、分散的微生物细胞，以引起绝大多数细胞致死的同时，使存活个体中的突变频率大大提高。 筛选（定向） 设计有效的筛选方法，将少量正变株中的优良菌株挑选出来。 第二页，共二十三页，2022年，8月28日 （一） 出发菌株（original strain） 出发菌株指用于诱变育种的起始菌株。 具有有利性状（如高产、生长速度快、营养要求粗放、 标记明显等）； 对诱变剂敏感 野生型菌株； 从生产中选育的自发突变菌株； 诱变获得的高产菌株 出发菌株的选择标准： 出发菌株的来源： 第三页，共二十三页，2022年，8月28日 （二） 菌悬液的制备 1. 选用单细胞或单孢子悬液（均匀、分散） 目的：①使每个细胞能均匀接触诱变剂； ②减少表型延迟现象（诱变后性状的分离及退化现象） 2. 同步培养（生理状态一致） 3. 菌龄：对诱变剂最敏感时期 营养细胞：对数期 孢子或芽孢：萌发前期 4.菌悬液的制备方法 物理诱变：生理盐水配制 化学诱变：缓冲液配制 5. 菌悬液的浓度 酵母菌，霉菌的孢子：106个/mL 细菌，放线菌孢子：108个/mL 第四页，共二十三页，2022年，8月28日 （三）诱变剂的选择及处理方法 1. 诱变剂的选择（高效，简便） 物理诱变剂：频度低、大损伤，难修复，且操作简便； 化学诱变剂：频度高，点突变，易回复突变，操作麻烦。 ( NTG——超诱变剂） UV是最常用的一种诱变剂 第五页，共二十三页，2022年，8月28日 2. 剂量的选择 突变率随剂量的增加而提高，但到达一定程度后，再提高剂量, 反而会使突变率下降。 正变较多出现在偏低剂量中，而负变较多出现在偏高剂量中。 在产量变异工作中，常采用相对杀菌率为70~75%, 甚至30~70%的剂量。 UV的剂量: 固定UV功率和照射距离,以照射时间长短来确定剂量多少。 最适剂量：在提高突变率的基础上，既能扩大变异幅度， 又能使变异向正突变范围移动的剂量。 常以杀菌率来表示相对剂量（剂量-存活率曲线） 第六页，共二十三页，2022年，8月28日 3. 诱变处理方法 单因素处理或多因素的复合处理： ①同一诱变剂的重复使用； ②两种或多种诱变剂的先后使用； ③两种或多种诱变剂的同时使用. 第七页，共二十三页，2022年，8月28日 （四） 中间培养（CM，培养过夜） 目的：克服表型延迟 表型延迟（phenotypic lag）：表型的改变落后于基因型改变的 现象. 分离性延迟： 突变的基因经DNA复制和细胞分裂后变成纯 合状态，表型才能表现出来。 生理性延迟： 由杂合状态变为纯合状态，突变表型仍不能 表现出来。 分离性延迟的原因: 对数生长期中，单核细胞常出现双核现象，多核细胞的核也成倍增加，诱变对数期的细胞时，突变通常发生在一个核上，故其变异或非变异的细胞必须经过一代或几代繁殖才能分离，这种纯种变异细胞出现的推迟现象称为分离延迟现象。 生理性延迟的原因: 当变异细胞由杂合状态变为纯合状态时,由于杂合期所合成的非变异的蛋白或酶仍然发挥作用,必须经过细胞多代分离后,才能将这些非变异的酶稀释掉,最终达到变异后应该表现的形态,如营养缺陷型突变株的筛选过程。 生理性延迟: 第八页，共二十三页，2022年，8月28日 （五）突变株的筛选 初筛 复筛 1. 初筛（以量为主） （1）利用形态变异：需预先测定形态与产量的相关性 （2）根据平板颜色反应直接挑选 透明圈法（