RNA的生物合成制药.pptxVIP

RNA的生物合成制药;复制和转录的区别;参与转录的物质：;原核生物转录的模板和酶 Templates Enzymes in Prokaryotic Transcription;一、原核生物转录的模板;5′···GCAGTACATGTC ···3′;;二、RNA合成由RNA聚合酶催化;DNA聚合酶在启动DNA链延长时需要引物存在，而RNA聚合酶不需要引物就能直接启动RNA链的延长。 RNA聚合酶和DNA的特殊序列——启动子(promoter)结合后，就能启动RNA合成。 ;（二）RNA聚合酶由多个亚基组成;核心酶 (core enzyme);三、RNA聚合酶结合到DNA的启动子上起动转录;调控序列中的启动子是RNA聚合酶结合模板DNA的部位，也是控制转录的关键部位。原核生物以RNA聚合酶全酶结合到DNA的启动子上而起动转录，其中由σ亚基辨认启动子，其他亚基相互配合。 对启动子的研究，常采用一种巧妙的方法即RNA聚合酶保护法。;;RNA聚合酶全酶在转录起始区的结合:;第16页/共66页;原核生物的转录过程 The Process of Transcription in Prokaryote;RNA聚合酶必须准确地结合在转录模板的起始区域。 DNA双链解开，使其中的一条链作为转录的模板。;E.coli的转录起始和延长 ;2. DNA双链局部解开，形成开放转录复合体(open transcription complex) ；;第一个磷酸二酯键生成后，σ亚基即从转录起始复合物上脱落，核心酶连同四磷酸二核苷酸，继续结合于DNA模板上，酶沿DNA链前移，进入延长阶段。 ;二、 原核生物的转录延长时蛋白质的翻译也同时进行;转录空泡(transcription bubble)：;;依赖Rho 因子的转录终止 非依赖Rho因子的转录终止;ρ因子是由相同亚基组成的六聚体蛋白质，亚基分子量46kD。 ρ因子能结合RNA，又以对poly C的结合力最强。 ρ因子还有ATP酶活性和解螺旋酶(helicase)的活性。;ρ因子的作用原理：;第28页/共66页;（二） 非依赖 Rho因子的转录终止;5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU... 3` ;茎环结构使转录终止的机理：;第32页/共66页;真核生物的转录过程 The Process of Transcription in Eukaryote;真核生物的转录过程比原核复杂。二者的转录起始过程有较大区别，转录终止也不相同。 ;一、 真核生物有三种DNA依赖性RNA聚合酶;真核生物的RNA聚合酶;真核生物RNA聚合酶的结构比原核生物复杂，所有真核生物的RNA聚合酶都有两个不同的大亚???和十几个小亚基. RNA聚合酶Ⅱ由12个亚基组成，其最大的亚基称为RBP1。 RNA聚合酶Ⅱ最大亚基的羧基末端有一段共有序列(consensus sequence)为Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser的重复序列片段，称为羧基末端结构域(carboxyl-terminal domain, CTD)。 CTD对于维持细胞的活性是必需的。;二、转录起始需要启动子 、RNA聚合酶和转录因子的参与;一个典型的真核生物基因上游序列:;顺式作用元件包括启动子、启动子上游元件(upstream promoter elements)或promoter-proximal elements)等近端调控元件和增强子(enhancer)等远隔序列。 起始点上游多数有共同的TATA序列，称为Hognest盒或TATA盒(TATA box)。通常认为这就是启动子的核心序列。 ;许多RNA聚合酶II识别的启动子具有保守的共有序列：位于转录起始点附近的起始子(intiator，Inr) 。 启动子上游元件是位于TATA盒上游的DNA序列，多在转录起始点约-40～-100nt的位置，比较常见的是GC盒和CAAT盒。 增强子是能够结合特异基因调节蛋白， 促进邻近或远隔特定基因表达的DNA序列。;;（二） 转录因子;参与RNA-polⅡ转录的TFⅡ;（三） 转录起始前复合物;PIC的形成;第47页/共66页;三 、真核生物转录延长过程中没有转录与翻译同步的现象;;四、真核生物的转录终止和加尾修饰同时进行;真核生物的转录终止及加尾修饰;真核生物RNA的加工 Post-transcriptional Modification of Eukaryotic RNA;真核生物转录生成的RNA分子是初级RNA转录物(primary RNA transcript)，几乎所有的初级RNA转录物都要经过加工，才能成为具有功能的成熟的RNA。 加工主要在细胞核中进行。;一、真