第五章基因的分离与鉴定详解演示文稿.pptVIP

1.假阳性比例高（50%～75%）； 同一长度的条带，含有多种DNA序列；邻近条带回收时，造成人为误差；mRNA3’-端序列保守性高，而常用3’-端cDNA作探针 2.扩增的差别条带分子长度比较短小（110～450bp）； 局限性： 现在是30页\一共有78页\编辑于星期五 应用表达文库 分离克隆的目的基因 现在是31页\一共有78页\编辑于星期五 当没有可用的核苷酸序列供作筛选基因文库的探针时，将cDNA克隆在表达载体上，再导入大肠杆菌寄主细胞然后通过对蛋白质产物的鉴定，分离克隆的真核目的基因。 表达文库分离克隆的目的基因 现在是32页\一共有78页\编辑于星期五 1.表达的蛋白质以融合蛋白质的形式存在，其中原核蛋白质的氨基酸序列是整合在真核蛋白质的一个末端，不易被原核细胞中的有关蛋白酶消化降解，因而显得比较稳定，可以得到较高的表达水平。 2. cDNA片断必须置于启动子序列下游，在其控制之下；按正确的取向和读码结构插入，确保产生正确的蛋白质。 特点： 现在是33页\一共有78页\编辑于星期五 1. 利用抗体筛选表达文库； 2. 测定蛋白质的功能； 3. 用放射性同位素标记的、带有特定蛋白质结合位点的DNA片断作探针筛选表达文库。 筛选的方法