核酸的制备与提取.pptxVIP

核酸的制备与提取;第一部份、核酸的基本知识;1868年瑞士科学家米歇尔(F.Miescher)发現细胞核內含高量磷的酸性物质，命名为核素(后改名为核酸) 早期的研究仅将核酸看成是细胞中的一般化学成分，没有人注意到它在生物体内有什么功能； ;核酸作为遗传物质的发現过程;一 核酸的概念和重要性 (一)概念 由核苷酸或脱氧核苷酸通过3′，5′-磷酸二酯键连接而成的一类生物大分子，具有非常重要的生物功能，主要是贮存遗传信息和传递遗传信息。包括核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)两类。 (二)重要性 1.与生命活动关系密切，是重要的生命物质。生命的起源、生长、发育、衰老、死亡与之有关。 2.核酸研究是现代生物医学研究的核心。;二、 核酸的类别、分布和组成 （一）、类别： 核酸(nucleic acid)分为: 脱氧核糖核酸(DNA, deoxyribonucleic acid )与核糖核酸(RNA, ribonucleic acid )。 核糖核酸（RNA）分成以下几类： 1、信使RNA（mRNA） 2、转移RNA（tRNA） 3、核糖体RNA（rRNA） 4、其他的非编码RNA (snRNA, microRNA);（二）、核酸的分布： 1、DNA的分布： 真核生物细胞核，线粒体亦含有DNA. 原核生物集中于核区，核外的质粒 病毒含有DNA或RNA. 2、RNA的分布 存在于细胞质和细胞核中。 发现了许多新的具有特殊功能的RNA： 如反义RNA，核酶等. 病毒和亚病毒RNA有许多种：正链RNA、负链RNA病毒、 类病毒、卫星病毒等 . ?;（三） 核酸的组成;RNA为D-核糖，DNA为 D-2-脱氧核糖，二者都是β 型。差别：2 位羟基是否脱氧。;（2）碱基： a、嘌呤碱：腺嘌呤（Ade)、鸟嘌呤(Gua) b、嘧啶碱：胞嘧啶(Cyt)、尿嘧啶(Ura)、胸腺嘧啶(Thy) ; ; 碱基相连（核苷）;一切生物的遗传物质——核酸;一、核酸的一级结构 （一）核酸中核苷酸的连接方式 DNA、RNA中的脱氧核苷酸、核苷酸是通过3‘，5‘ –磷酸二酯键连接的。 表示方法：书写顺序5‘——3’。 核酸的一级结构是指核酸分子中各核苷酸残基以磷酸二酯键连接、沿多核苷酸链排列的顺序。;核苷酸的组成与连接;DNA的一级结构图示;（二）一级结构的表示方法;2 、一级结构特点 DNA的相对分子量非常大，能编码的信息量十分巨大。 ???菌的基因是连续的,无内含子功能相关基因组成操纵子，有共同的调控序列，较少重复序列。 真核生物的基因是断裂的，有内含子功能相关基因不组成操纵子，调控序列占比重大，有较大重复序列,又分为高度重复、中度重复、单一序列。此外还有回文结构. 越是高等的真核生物其调控序列和重复序列的比例越大。;二、DNA的二级结构 （1）、模型建立的依据： Chargaff等科学家用纸层析及紫外分光光度技术分析了各种生物的DNA的碱基组成。结果显示： 摩尔数 A=T；G=C；A+C=G+T； A+G=C+T;腺嘌呤;双螺旋平面图 The double helix maintains a constant width because purines always face pyrimidines in the complementary A-T and G-C base pairs. The sequence in the figure is T-A, C-G, A-T, G-C.;（2）DNA双螺旋的特点： A、两条反平行多核苷酸链绕中心轴缠绕，右手螺旋； B、骨架：内侧碱基垂直于纵轴； 外侧-磷酸与戊糖、彼此通过3’、5’磷酸二酯键，糖环平面与纵轴平行。 大沟宽1.2nm，深0.85nm； 小沟宽0.6nm，深0.75nm； C、直径：2nm，二相邻碱基高度0.34nm，二核苷酸夹角36度，旋转一周10个核苷酸，一周高度3.4nm；;三、DNA的三级、四级结构： 细长的分子以一种高度压缩状态存在于细胞中，双螺旋的进一步扭曲就构成了三级结构。 超螺旋，三级结构中的一种。 DNA压缩总原则：多级螺旋，4级压缩。;;四、RNA分子的结构与功能 （一）、RNA的类别 1 信使RNA (messenger RNA, mRNA); 2 转移RNA (transfer RNA , tRNA); 3 核糖体RNA (ribosomal RNA , rRNA);;第26页/共104页;（二）、RNA结构的特点;1、mRNA;5‘Cap的功能：;;tRNA有“接头” (adaptor)功能，具备双重特性； 识别氨基酸——其 3’末端的腺苷酸可与一氨基酸共价连接 识别密码子——反密码子与mRNA中的密