植物类中药材中氟虫腈的快速检测--胶体金免疫层析法.pdfVIP

植物类中药材中氟虫腈的快速检测--胶体金免疫层析法 1 范围 本方法规定了植物类中药材中氟虫腈的胶体金免疫层析快速检测方法。 本方法适用于枸杞、薄荷、金银花、党参和当归等植物类中药材中氟虫腈的快速测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 《中国药典》2020年版 第四部 GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验室方法 国市监食检规〔2023 〕1号 市场监管总局关于规范食品快速检测使用的意见 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 本方法采用竞争抑制免疫层析原理，在检测微孔中冻干金标抗体，在硝酸纤维素膜的检测线（T线） 和质控线（C线）处分别包被抗原和单克隆抗体。从样品垫中泳动过来的过量胶体金标记的单克隆抗体 可被固定于质控线（C线）的单克隆抗体所捕获，使质控线（C线）显色。样本中若含有氟虫腈，在微孔 温育过程中与胶体金标记的单克隆抗体结合，从而抑制金标抗体与硝酸纤维素膜上包被的抗原结合，导 致检测线（T线）颜色变浅，因此，通过检测线与质控线（C线）颜色深浅比较，对样品中氟虫腈进行定 性判定。 5 试剂与材料 5.1 试剂 除另有说明外，所有试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T 6682 中三级水的要求。 5.1.1 甲醇 （CH3OH ）。 5.1.2 Tris 缓冲液（0.1 mol/L ，pH8.0 ）。 5.1.3 标准物质：氟虫腈标准物质的中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子质量见表1， 纯度≥98% 。 表1 氟虫腈标准物质的中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子质量 中文名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子质量 氟虫腈 Fipronil 120068-37-3 C H Cl F N OS 437.15 12 4 2 6 4 注：或等同可溯源物质。 1 5.1.4 氟虫腈标准储备液 （100 μg/mL ）：准确称取氟虫腈标准物质 （5.1.3 ）100 mg （精确到0.1mg ）， 置于 1000 mL 容量瓶中，用甲醇 （5.1.1 ）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成100 μg/mL 的标准储备液。- 20 ℃避光保存，保质期6 个月。 5.1.5 氟虫腈标准工作液 （1 μg/mL ）：精密移取氟虫腈标准储备液 （100 μg/mL ）（5.1.4 ）0.1mL，置 于10 mL 容量瓶，用甲醇 （5.1.1 ）稀释至刻度，摇匀，制成浓度1 μg/mL 的标准工作液。临用新配。 5.2 材料 5.2.1 固相萃取（Solid Phase Extraction，简称SPE）净化小柱，填料比例为氧化铝：硅藻土：C18=70 ： 30 ：20 。需在阴凉、干燥、避光条件下保存。 5.2.2 氟虫腈胶体金免疫层析试纸条，适用基质为中药材。需在阴凉、干燥、避光条件下保存。 6 仪器与设备 6.1 电子天平：感量为0.01 g 及0.0001 g 。 6.2 移液器：量程为10 μL ~1000 μL 。 6.3 均质器。 6.4 涡旋仪。 6.5 胶体金读数仪（可选）。 7 分析步骤 7.1 试样制备 取适量代表性样品，充分均质混匀。 7.2 试样提取与净化 称取1 g枸杞、薄荷、金银花、党参和当归（精确至0.05 g ）放入15 mL离心管中，加入4 mL 甲醇（色 谱级）提取，IKA型涡旋仪高速涡旋1 min ，静置30 sec或3000 rpm离心2 min ，上清液即为提取液。 准确吸取500 μL 提取液于SPE 净化小柱，依靠重力让其自然滴下，用2 mL 离心管收集流穿液。 7.3 测定步骤 将收集到的流穿液用0.1 mol/L Tris 8.0 稀释10 倍（25 μL 流穿液，225 μL 0.1 mol/L Tris 8.0