实验三双缩脲法蛋白质含量测定.pptxVIP

实验三双缩脲法蛋白质含量测定;蛋白质含量测定 ;实验目的;实验原理 ; 紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：Tris缓冲液和某些氨基酸等。 此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。 ;蛋白质测定方法: 双缩脲法（biuret法） 微量凯氏（kjeldahl）定氮法 folin—酚试剂法 考马斯亮兰法 紫外吸收法 总蛋白定量分析－BCA;实验试剂与器材 ;（二）、实验器材 可见光分光光度计 ; 分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射下，产生了对光吸收的效应，物质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合比色原理——Lambert-Beers law: 数学表达式:  A=lg(1/T)=KCL A为吸光度 T为透射率,是投射光强度比上入射光强度 C为吸