生物学细胞培养细胞培养用液及培养基.pptxVIP

生物学细胞培养细胞培养用液及培养基第1页/共33页 主要内容 培养用液 培养基（液）第2页/共33页 培养用液 细胞培养时，除需要培养基，还需要大量的液体，包括水盐溶液消化液缓冲液维生素液等3第3页/共33页 培养用液水细胞培养所必须的成分（吸收与代谢）维持细胞形态、调节渗透压及PH细胞培养对水质的要求极高第4页/共33页 培养用液水自来水蒸馏水 （三蒸）离子交换水第5页/共33页 培养用液水第6页/共33页 培养用液水超纯水 将水中的导电介质几乎完全去除，又将水中不离解的胶体物质、气体及有机物均去除至很低程度的水。电阻率大于18MΩ*cm，或接近18.3MΩ*cm极限值。第7页/共33页 培养用液平衡盐溶液（BSS）组织细胞培养基中常用的基本液体。功能 维持渗透压、调节PH、供给细胞生存所需能量及无机离子成分。用途 合成培养基（液）的基础液及用于洗涤组织、细胞等第8页/共33页 培养用液平衡盐溶液9第9页/共33页 培养用液消化液-用途分散组织、细胞使细胞脱离附着底物第10页/共33页 培养用液消化液-成分胰蛋白酶二乙烯四乙酸二钠（EDTA）胶原酶溶液第11页/共33页 培养用液消化液-胰蛋白酶胰蛋白酶： 从动物胰脏分离的一种水解酶功能： 使细胞间的蛋白质水解、细胞分散配置比例： 1:125 或 1:250第12页/共33页 培养用液消化液-胰蛋白酶注意事项配置胰蛋白酶消化液时应采用不含Ca2+、Mg2+和血清的液体使用时，一旦细胞分散后，立即用适量含血清的培养基终止消化反应第13页/共33页 培养用液消化液-EDTA EDTA是一种化学螯合剂，能螯合Ca2+、Mg2+而使细胞分离，对细胞毒性较小。 工作浓度： 0.02%第14页/共33页 培养用液消化液-EDTA 注意事项 ① 需用不含离子的平衡盐缓冲液溶解 ② 与胰酶联合使用可提高消化效率 ③ EDTA不能被血清中和，消化后应彻底 清洗第15页/共33页 培养基（液） 维持体外细胞生存和生长的基本溶液，是组织细胞培养最重要的条件分类天然培养基合成培养基第16页/共33页 培养基（液）-天然培养基 取自动物体液或从动物的组织中分离提取优点营养成分丰富，培养效果良好缺点成分复杂，来源受限第17页/共33页 培养基（液）-天然培养基类型生物性液体（血清）组织浸液（胚胎浸液）凝固剂（血浆）……第18页/共33页 培养基（液）-天然培养基血清最常用的天然培养基促进细胞生长繁殖、粘附并中和usu常用的血清为小牛血清和胎牛血清第19页/共33页 培养基（液）-天然培养基血清-使用注意事项使用前需灭活-20℃保存，避免反复冻融优质血清外观为透明、无溶血、淡黄色液体、无沉淀，灭活后颜色略深保证无菌，且球蛋白含量越低者质量越佳第20页/共33页 培养基（液）-天然培养基血清-鉴定方法细胞集落形成率连续传代培养生长曲线法第21页/共33页 培养基（液）-天然培养基血浆可支持培养组织块，且还供给细胞生长的营养物质，但易发生液化。常用禽类血浆 小于一岁的雄性鸡类 该类血浆钙水平恒定，激素含量少，易于采集，整个采集过程需要注意无菌第22页/共33页 培养基（液）-合成培养基 对细胞体内生存环境中各种已知物质在体外人工条件下模拟 为细胞提供了一个近似体内生存环境、又便于控制和标准化的体外生存环境。第23页/共33页 培养基（液）-合成培养基成分氨基酸-L型氨基酸 谷氨酰胺维生素糖类无机离子其他成分第24页/共33页 培养基（液）-合成培养基常用培养基199培养液Eagle培养液RPMI-1640Ham培养液第25页/共33页 培养基（液）-合成培养基常用培养基199培养液 在Earle生理盐水的基础上添加各种添加成分。因配置比较复杂，现已较少使用。第26页/共33页 培养基（液）-合成培养基常用培养基Eagle培养 Eagle等人在该培养基的基础上，将13种氨基酸和8种维生素浓度调整至接近细胞内含量水平，制成最低必须培养基（Eagle’s minimum essential media, MEM） MEM为目前常用的培养基第27页/共33页 培养基（液）-合成培养基常用培养基Eagle培养 BME MEM 高糖型- DMEM 低糖型生长快粘附差第28页/共33页 培养基（液）-合成培养基