常用免疫分析方法.pptx

8.3 抗原抗体反应及应用 抗原抗体反应及应用 由于抗原与抗体之间可以发生高度特异的专一性结合，利用这个原理开发出了一系列免疫学技术方法，常用的有： 沉淀反应 凝集反应 免疫标记技术 补体参与的抗原抗体反应 免疫沉淀反应 在体外当抗原与相应抗体浓度比例适当时，会发生免疫沉淀反应，广泛用于抗原或抗体的定性及定量分析。根据反应介质和检测方法不同，沉淀反应可分为： 以含盐缓冲溶液为介质的液相沉淀 常用方法有絮状沉淀试验、环状沉淀试验与免疫浊度试验等。 凝胶扩散沉淀 琼脂或琼脂糖凝胶内部是一种大孔径网状结构，抗原和抗体可自由扩散。两者扩散相遇形成复合物，若在相遇处比例适当，则复合物颗粒增大，不再继续扩散而产生沉淀，呈现出线状或带状。 根据抗原抗体反应的方式可分为免疫单扩散试验与免疫双扩散实验。 免疫单扩散：定量抗体混匀在琼脂凝胶中，加待测抗原溶液使其单独在凝胶中扩散，形成沉淀环，沉淀环大小与抗原的浓度成正比。 免疫电泳技术结合了电泳分析与沉淀反应的优点，大大加快了沉淀反应的速度，将某些蛋白组分根据带电荷的不同而分开，再与抗体反应，从而使本法更为微量化，多样化。常用技术有： 血清免疫电泳（IEP） 火箭免疫电泳（RIEP） 对流免疫电泳 血清免疫电泳 免疫凝集反应 凝集反应是指颗粒性抗原或表面覆盖抗原（或抗体）的颗粒状载体，与相应抗体（或抗原）结合，在一定条件下，形成肉眼可见的凝集团块现象。 根据反应方式与特点，凝集反应有直接凝集实验、间接凝集试验、间接凝集抑制试验、抗球蛋白试验、协调凝集试验等多种不同形式。 红细胞直接凝集试验 妊娠检测间接凝集抑制试验 免疫标记技术 免疫标记技术是指用酶、荧光素、同位素等物质标记抗体或抗原进行抗原抗体反应，检测抗原或抗体的技术。具有灵敏度高、快速、可定性、定量、定位等优点。 放射免疫分析：同位素标记的免疫分析法 常用同位素有125I，131I，3H，35S。 广泛用于激素、药物等小分子化合物的定量分析。 酶联免疫吸附试验 将抗原或抗体吸附在固相（如聚苯乙烯微量板、磁珠等）表面，用酶标抗体或抗原与之反应后，根据固定酶催化底物颜色变化的深浅检测抗原或抗体，此所谓酶联免疫吸附试验（ELISA）。 ELISA常用酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶等。广泛用于食品安全检测、病原体鉴定、生物大分子甄别及药物组分分析等诸多领域。 ELISA试剂盒 直接法：抗原或抗体固定酶标抗体或抗原与固相反应，洗脱游离的抗原或抗体固定的酶量与受检物量正相关底物酶促反应，产物颜色深浅反映受检物量多少。 间接法是检测抗体最常用的方法，利用酶标记的抗抗体检测已与固相结合的受检抗体。 双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法。 间接法 双抗体夹心法 免疫荧光技术 免疫荧光技术是将免疫学方法与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。 已知抗体标记成荧光分子探针检查细胞或组织内的相应抗原。抗原抗体复合物携带荧光素，利用荧光显微镜观察样本，可见荧光所在的细胞或组织，从对抗原进行定性、定位乃至定量检测。 常用荧光素：异硫氰酸荧光素（黄绿色荧光），罗丹明（红色荧光）。 免疫荧光标记的成纤维细胞微管 亲和标记的免疫分析：利用一些特殊蛋白的亲和作用，结合荧光标记或酶标方法可以避免酶标抗体制备的繁琐，广泛应用于免疫分析系统。常用的亲和标记系统有： SPA能与Fcγ结合，故可用作荧光标记或酶标抗抗体； 小分子生物素能与亲和素或链亲和素组成生物素亲和素系统（BAS），可用于抗体芯片系统。 抗体芯片中的生物素亲和免疫标记 补体结合实验 实验系统：待测抗原或抗体、对应已知抗体或抗原； 指示系统：补体、红细胞、溶血素（即红细胞抗体）。 课后思考题 名词解释：沉淀反应 凝集反应 ELISA 常用的免疫分析方法有哪些，试举几例说明。 什么是凝集反应，试说明妊娠检测试验的原理。 什么是ELISA，你知道哪些ELISA检测方法？ 谢谢观看