二零二三年 优质公开课盐析法.pptx

生物技术及应用专业教学资源库盐析法 盐析概念一盐析的原理二目录一二盐析的注意事项三 一、盐析概念 在高浓度的中性盐存在下，蛋白质(酶)等生物大分子物质在水 溶液中的溶解度降低，产生沉淀的过程。 盐析是可逆的。而变性是不可逆的。 早在1859年，中性盐盐析法就被用于从血液中分离蛋白质，随后又在尿蛋白、血浆蛋白等的分离和分级中使用，得到了比较满意的结果。 蛋白质在稀盐溶液中，溶解度随盐浓度的增高而上升(盐溶)但当盐溶度增加到一定数值时，其溶解度有随盐浓度逐渐下降，直至蛋白，质析出(盐析)。 盐析的内因是当盐浓度达到- -定程度时，水的活度降低，导致蛋白质分子表面电荷中和，水化膜相继破坏，蛋白质分子聚集而析出沉淀。二、盐析的原理 常用的盐析用盐主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、磷酸二氢钠等。实际应用中以硫酸铵最为常用。因为硫酸铵具有:①离子强度大，盐析能力强②溶解度大且受温度的影响小③不易使蛋白质变性④价格价廉三、盐析常用盐 1.要有较强的盐析效果2.要有足够大的溶解度，且溶解度受温的影响效果小3.不影响蛋白质等生物大分子的活性4.来源丰富，价格低廉四、盐析所用无机盐的选择原则 盐饱和度的影响:不同的蛋白质，其结构和性质不同，盐析时所需的饱和度也就不同。蛋白质浓度的影响: - -般常将蛋白质浓度控制在2-3%为宜。pH的影响:进行盐析时的pH，要选择在被盐析的