临床分子生物学检验技术-医学院课件.pptx

临床分子生物学检验技术《临床分子生物学检验技术》利用分子生物学技术研究人体内源和外源性生物大分子即核酸与蛋白质的存在、结构和表达的改变。为疾病的预测、预防、诊治和转归提供分子水平信息的一门学科。临床分子生物学检验技术的发展第一阶段 ：第二阶段 ：DNA分子杂交技术1976 华裔简悅威α-地中海贫血PCR技术Molecular biology technology第三阶段 ：第四阶段 ：DNA测序技术、生物质谱技术生物芯片技术临床分子生物学检验技术应用DNARNA蛋白质代谢产物分子生物标志物的概念与分类生物标志物（biomarker）可以客观的测量和评价，可作为正常的生理过程、疾病过程或者药物对治疗干预的反应指标。分为：0型-疾病发生过程中自然出现的生物标志物；1型-治疗手段介入并产生疗效时出现的生物标志物；2型-可以代表临床终点事件的生物标志物。分子生物标志物（molecular biomarkers）是生物标志物的一种类型，是指可以反映机体生理、病理状态的核酸、蛋白质（多肽）、代谢产物等生物分子。分为核酸分子生物标志物（DNA和RNA）、蛋白质生物标志物和代谢产物生物标志物。核酸生物标志物是临床分子生物学检验的主要内容。（一）DNA生物标志物DNA分子标志物最主要的分子生物标志物，DNA序列的改变（突变或者多态性）或者含量本身发生变化，与疾病有密切的关系。（二）RNA生物标志物RNA生物标志物也是重要的分子生物标志物，包括mRNA、异常剪接转录本、microRNA以及lnRNA等。（三）蛋白质生物标志物蛋白质生物标志物包括蛋白质和磷酸化、糖基化修饰的蛋白质。研究方法：免疫学方法（传统）、蛋白质组学研究技术、蛋白质芯片等。核酸分子生物标志物之基因组和基因组特征基因组（genome）：是指一个细胞或一种生物体的整套遗传物质，包括基因和非编码DNA。更准确地讲，一个生物体基因组是指一套染色体中的完整的DNA序列。自然界中，从简单的病毒到复杂的高等动植物，都具有独特的基因组。一、原核生物基因组原核生物（prokaryote）原核生物基因组通常是由一条环状双链DNA分子组成，以类核的形式存在于细胞中，习惯上也称之为染色体。感染性疾病的分子生物学检验对病原体进行基因组检测，可以对感染者作出确诊，也能检测出带菌者和潜在感染者。还可以进行分型，耐药监测和分子流行病学调查。1.原核生物基因组特征：（1）基因组较小通常由一条环状双链DNA（double stranded DNA，dsDNA）分子组成。 大肠杆菌基因组DNA由4.6×106 bp组成，是人类基因组的1‰，且基因数目也较少，大约含3500个基因。 （2）原核生物没有的细胞核，具有类核结构原核生物基因组特点：（3）原核生物具有操纵子结构操纵子（ Operon ）是原核生物基因转录的基本单位，是基因表达调控的一个完整单元，由调控区和功能密切相关的几个结构基因串联在一起组成。原核生物的mRNA是多顺反子mRNA（polycistronic mRNA ）原核生物的一个mRNA分子带有几种蛋白质的遗传信息，可以编码几种不同的，但多为功能相关的蛋白质。原核生物基因组特点：（4）原核生物的结构基因①无内含子②基因之间有重复序列③多数结构基因为单拷贝只有编码rRNA和tRNA的基因有多个拷贝，有利于核糖体的快速组装和蛋白质的急需合成。④结构基因编码顺序一般不重叠原核生物基因组特点：（5）具有编码同工酶的基因基因结构不同，表达产物功能相同，如大肠杆菌细胞中有两个编码乙酰乳酸合成酶的同工酶基因。（6）具有可移动DNA序列包括插入序列、转座子以及染色体以外的质粒等，使不同物种和个体间进行基因转移。2.质粒（plasmid）及其特征质粒是指细菌细胞染色体以外，能独立复制并稳定遗传的共价闭合环状双链DNA分子。按复制机制不同：严紧型质粒：存在一个或几个拷贝，它们与染色体的复制受相同因素的控制，在一定的细胞周期内复制，染色体不复制时，质粒也不复制，如F因子。松弛型质粒：复制不受严格的控制，具有自行复制单位，在整个细胞生长周期中可以随时复制，一般可达10余个甚至更多，如ColE1质粒。按功能不同：F质粒：也称F因子（ fertility factor ）即性质粒；R质粒：也称R因子 (Resistance factor)抗药性粒；Col质粒：含有编码大肠杆菌素的基因。二、病毒基因组 病毒（virus）是自然界普遍存在的一种结构简单，不能单独繁殖，只能在宿主细胞内进行复制以保证遗传信息传递的微生物。完整的病毒颗粒是由核酸和蛋白质组成。病毒基因组特征1.基因组的碱基组成差异大基因组大小：1.5*103bp-3.6*106bpG+C含量：疱疹病毒75%，痘病毒26%2.基因组核酸类型复杂病毒类型 举例DNA病毒双链D