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基因工程教学第1页/共50页第2页/共50页我们主要讨论4个问题：1. 什么是基因工程——基因工程的概念。2. 为什么能进行基因工程——基因工程的原理和技术。3. 怎样进行基因工程——4大步骤4. 基因工程的应用和前景第3页/共50页一、基因工程1、概念：又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。原 理：基因重组DNA分子水平表达水平：过程：1、定向改造某些性状2、克服远缘杂交意义：第4页/共50页原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区编码区上游 编码区下游 启动子终止子RNA聚合酶结合位点启动子：位于基因首端一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。没有启动子，基因就不能转录。终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，它能阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下来，使转录终止。RNA聚合酶:能够识别启动子上的结合位点并与其结合的一种蛋白质.(以模板转录然后脱落)第5页/共50页编码区上游 编码区下游 启动子终止子编码区：能转录相应的信使RNA，能 编码蛋白质 原核细胞的 基因结构①不能转录为信使RNA，不能 编码蛋白质。非编码区②在遗传信息的表达过程中起着调控作用非编码区非编码区编码区第6页/共50页非编码区非编码区真核细胞的基因结构编码区编码区上游 编码区下游 启动子终止子RNA聚合酶结合位点外显子 内含子 外显子： 能够编码蛋白质的序列叫做外显子 内含子： 不能够编码蛋白质的序列叫做内含子（但能转录为mRNA，转录后剪切掉）第7页/共50页真核细胞的 基因结构外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列编码区非编码区：在遗传信息的表达过程中起着调控作用第8页/共50页原核细胞与真核细胞基因结构比较：编码区非编码区非编码区终止子启动子内含子 外显子 原核细胞真核细胞不同点相同点编码区是间隔的，不连续的编码区是连续的 都由能够编码蛋白质的编码区和具有调控作用的非编码区组成第9页/共50页2.基因工程的三大理论基础（1）20世纪40年代，Avery 通过 肺炎双球菌体外转化实验，确定了生物遗传物质的化学本质是DNA;（2）19世纪50年代James D. Watson和Francis H. C. Crick揭示了DNA分子的双螺旋结构和半保留复制机制，解决了基因的自我复制和传递的问题。第10页/共50页(3) 1958年Crick又提出了遗传信息传递的“中心法则”; 1964年Marshall Nirenberg和Gobind Khorana等破译了64个遗传密码，从而阐明了遗传信息的流向和表达问题第11页/共50页基因工程诞生的理论基础1．基因拼接(1)DNA的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸。(2)双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构。碱基互补配对原则第12页/共50页2．外源基因在受体内表达(1)基因是控制生物性状的独立遗传单位。(2)遗传信息的传递都遵循中心法则阐述的信息流动方向。(3)生物界共用一套遗传密码。第13页/共50页二、基因工程操作的工具1.基因的“剪刀”──限制性核酸内切酶（限制酶）　一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子。如:EcoRI限制酶专一性第14页/共50页思考:　被同一种限制酶切断的几个DNA是否具有相同的黏性末端？AATTCCGTAG 第15页/共50页CTTCATG AATTCCCTAA GGCATCTTAA GAAGTACTTAA GGGATT 练一练尝试写出下列序列受EcoRI限制酶作用后的黏性末端CTTCATGAATTCCCTAA GAAGTACTTAAGGGATT GAATTCCGTAGAATTCGGATT CTTAAGGCATCTTAAGCCTAA 第16页/共50页２、基因的针线──DNA连接酶　连接酶的作用是：将互补配对的两个黏性末端连接起来（磷酸二脂键），使之成为一个完整的DNA分子。第17页/共50页 A A T T C A A T T C A A T T CG G G G A A T T CG A A T T C用同种限制酶切割C T T A A GC T T A A C T T A A GC T T A A C T T A A G G G基因的针线：DNA连接酶第18页/共50页3、基因的运输工具——运载体 常用的运载体： 质粒、噬菌体和动植物病毒等 质粒存在于许多细菌和酵母菌等生物中,是细胞染色体外能够自