遗传实验人外周血培养与染.pptxVIP

遗传实验人外周血培养与染;1.学习外周血淋巴细胞悬浮培养的原理和方法； 2.利用培养后进行分裂的细胞制备人类染色体标本； 3.利用人类染色体核型分析软件进行核型分析。;二、实验原理：; ; ;4、核型和带型：;带型（banding pattern） 即染色体带型。借助细胞学的特殊处理程序，使染色体显现出深浅不同的染色带。染色带的数目、部位、宽窄和着色深浅均具有相对稳定性，所以每一条染色体都有固定的分带模式，即称带型。 常用的显带技术所显示的带有Q带、G带、C带、R带、T带等。就每一种分带技术而言，每一染色体的带型是高度专一和恒定的。 ;三、实验用具及试剂：;2. 实验试剂：;四、实验步骤：;4、制片： （1）离心：从温箱中取出培养瓶，用吸管将培养液转入10ml的刻度离心管内。2000转/分，离心10分钟。 （2）低渗：弃去上清液。加入37℃预热的0.075 mol/L KCl 低渗液6-8ml，用吸管轻轻吹打均匀，放在37℃恒温水浴中40分钟。 (此时配固定液：甲醇225ml+冰醋酸75ml ) （3）预固定：在离心管中加入现配的预温的甲醇-冰醋酸(3:1)固定液约1ml，轻轻混匀，37℃固定15分钟。;（4）再次离心：2000转/分离心10分钟。 （5）第一次固定：弃上清液，加入固定液约7ml，立即用吸管吹打使之成细胞悬液，室温固定20分钟。 2000转/分离心10分钟。 （6）第二次固定：同第一次固定。 （7）弃上清液，根据沉淀量的多少，加入适量固定液6～8滴，用吸管吹打使均匀后制成细胞悬液。 ; ;;核型分析仪及核型分析;五、注意事项:;六、实验结果与分析：;A组（No.1～ 3）：是最大的一组染色体，它们的着丝粒在中部或几乎在中部，为中部着丝粒染色体； B组（N0.4～5）：为两对大的亚中部着丝粒染色体，它们有明显的长臂和短臂； C组（N0.6～12+X）：为中等大小的亚中部着丝粒染色体，它们大小相差不多，X染色体大小介于期间，一般难以区分； D组（N0.13～15）：为中等大小的近端着丝粒染色体，它们的一个重要形态特征是随体，随体是一对着色很深的小球，处于短臂的末断，随体与短臂之间的区域很少着色； ;E组（N0.16～18）：包括一对中着丝粒染色体（16）???两对亚中着丝粒染色体（17、18）； F组（N0.19～20）：为两对小的中部着丝粒染色体； G组（N0.21～22+Y）：为最小的一组近端着丝粒染色体，在N0.21～22的短臂上可见随体。Y染色体常呈现异固缩状态，着色更深，可以识别。 人类染色体核型分析结果 ;重要参数：;;七、作业及思考题：;八、参考文献：;核型;带型;返回;;感谢观看！