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第1页/共56页生物种子扩大培养第2页/共56页种子的扩大培养种子扩大培养的目的与要求第一节 种子扩大培养的目的与要求种子扩大培养的概念: 种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。/jpkc/fjgc第3页/共56页种子的扩大培养种子扩培的目的种子扩大培养的目的与要求 接种量的需要 菌种的驯化 缩短发酵时间、保证生产水平种子的要求： 总量及浓度能满足要求 生理状况稳定，个体与群体 活力强，移种至发酵后，能够迅速生长 无杂菌污染/jpkc/fjgc第4页/共56页种子的扩大培养种子扩大培养的目的与要求第一节 种子制备过程举例一、谷氨酸生产的种子制备制备过程斜面菌种→一级种子培养→二级种子培养→发酵/jpkc/fjgc第5页/共56页种子的扩大培养1、斜面 (AS1.299)种子扩大培养的目的与要求培养基：蛋白胨 1%，牛肉膏1%，氯化钠 0.5 琼脂 2%， pH 7.0-7.2培养条件：32℃，生长18-24小时培养基特点：有利于菌体的生长，原料比较精细生长斜面要求：生长良好，所使用斜面连续传代不超过 3次/jpkc/fjgc第6页/共56页种子的扩大培养2. 一级种子（摇瓶）种子扩大培养的目的与要求培养基：葡萄糖2%，尿素0.5%，玉米浆 2.5%， K2HPO4 0.1%培养条件：于1000ml三角瓶中，装液200-250ml,32℃培 养12小时。培养基特点：有利于菌体的生长，所使用的原料已经基 本接近于发酵培养基/jpkc/fjgc第7页/共56页种子的扩大培养种子扩大培养的目的与要求3. 二级种子(种子罐)培养基：和一级种子相似，其中葡萄糖用水解糖代替， 浓度为2.5%培养条件：在种子罐中培养（容积为发酵罐的1%(10%)）， 32℃培养7-10个小时培养基的特点：长菌体，更接近于发酵培养基/jpkc/fjgc第8页/共56页种子的扩大培养种子扩大培养的目的与要求种子的质量要求：108-109个/ml大小均匀，呈单个或八字排列PH 7.0-7.2时结束，6.8→8→7.0-7.2活力旺盛/jpkc/fjgc第9页/共56页种子的扩大培养二、青霉素生产的种子制备种子扩大培养的目的与要求制备过程安培管→ 斜面孢子→ 大米孢子→ 一级种子→ 二级种子→ 发酵/jpkc/fjgc第10页/共56页种子的扩大培养一、斜面孢子种子扩大培养的目的与要求培养基：甘油、 葡萄糖、 蛋白胨等培养条件：25℃、7天, 注意湿度50%左右培养基特点：有利于长孢子，用量少而精细/jpkc/fjgc第11页/共56页种子的扩大培养二、大米孢子种子扩大培养的目的与要求培养基：大米及氮源（玉米浆）培养条件：25℃、7天，控制湿度培养基的特点：成本低、米粒之间结构疏松提高比表面积和氧的传质，营养适当（要求大米的白点小）有利于孢子的生长。大米孢子的要求：1粒米含1.4*106个孢子/jpkc/fjgc第12页/共56页种子的扩大培养3、一级种子种子扩大培养的目的与要求培养基：（葡萄糖、乳糖、蔗糖）、玉米浆培养条件：27℃，40小时接种量：200亿孢子/吨目的：长菌体4、二级种子培养基：同上培养条件：27℃、10-14小时接种量：10%/jpkc/fjgc第13页/共56页种子的扩大培养种子的质量要求种子扩大培养的目的与要求菌丝长稠呈丝状、菌丝团很少，有中小空孢，处于Ⅲ—Ⅳ期青霉素发酵菌丝体的生长共分为6个期，1-4为年青期，4-6期合成青霉素的能力最强/jpkc/fjgc第14页/共56页种子的扩大培养第二节 种子制备的技术概要种子制备的技术概要一、种子制备的过程实验室阶段：不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因此现象地将这些培养过程称为实验室阶段的种子培养。生产车间阶段：种子培养在种子罐里面进行，一般在工程归为发酵车间管理，因此形象地称这些培养过程为生产车间阶段。/jpkc/fjgc第15页/共56页种子的扩大培养二、实验室阶段种子制备的技术概要1、培养物选择的原则目的：种子扩培到一定的量和质，根据菌种的特点最终的培养物可分为两类： 对于不产孢子和芽孢的微生物 ——获得一定数量和质量的菌体对于不产芽孢和孢子的微生物，实验室阶段的种子扩培最终是获得一定数量和质量的菌体，如谷氨酸的种子培养。/jpkc/fjgc第16页/共56页种子的扩大培养种子制备的技术概要 对于产孢子的微生物 获得一定数量和质量的孢子菌丝体培养步骤少，因而更容易获得量和质稳定的种子，但操作繁琐。 获得一定数量和质量的菌丝体便于操作，但需要更仔细的控制。/jpkc/fjgc第17页/