质粒的提取定量鉴定.pptVIP

* 取1.5ml培养物加入Eppendorf管中 9000rpm×30 s，弃上清 加入250μl 溶液P1中，旋涡振荡，使细菌沉淀分散，彻底悬浮。 加入250μl 溶液P2，颠倒6～10次混匀（不要剧烈振荡），直到溶液变得清亮（溶液P2为裂解液，故离心管中菌液逐渐变清）。 加入400μl 溶液P3，立即温和颠倒数次混匀，见白色絮状沉淀，室温放置3-5min。（溶液P3为中和溶液，此时质粒DNA复性，染色体和蛋白质不可逆变性，形成不可溶复合物，同时使SDS-蛋白复合物沉淀），室温13000rpm离心10min，小心取上清液。 将吸附柱放于收集管中，加入500μl去蛋白液，室温13000rpm离心1min，弃滤液，将上一步所得上清液加入吸附柱中，13000rpm离心1min，弃滤液。 向吸附柱中加入500μl 漂洗液WB， 13000rpm离心1min ，弃滤液。 重复步骤6一次。 空柱13000rpm离心2min，室温放置3-5min，使残留乙醇挥发。 取出吸附柱，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间加50μl无菌水，室温放置1min，13000rpm离心1min洗脱质粒DNA， -20℃保存备用。 采用1％琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物、酶切产物以及提取的DNA 四、结果分析 DNA-marker 质粒DNA PCR产物 酶切产物 点样顺序 第六十二页，共六十三页