农业农村部公告第423号-9-2021CN.docx

ICS 65.020.01 CCS B 04 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 农业农村部公告第423号—9—2021 转基因植物及其产品成分检测 玉米常见转基因成分筛查 Detection of genetically modified plants and derived products— Screening of common genetically modified component in maizc 2021-05-07 发布 2021-11-01 实施 中华人民共和国农业农村部发布 农业农村部公告第423号—9—2021 前 言 本文件按照GB/T1.1—2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：农业农村部科技发展中心、黑龙江省农业科学院农产品质量安全研究所、中国农业 科学院生物技术研究所。 本文件主要起草人：温洪涛、张秀杰、杨洋、陈子言、张瑞英、李夏莹、李亮、丁一佳、关海涛。 1 农业农村部公告第423号—9—2021 转基因植物及其产品成分检测 玉米常见转基因成分筛查 1 范围 本文件规定了玉米中常见转基因成分的定性筛查方法。 本文件适用于31种转基因玉米及其加工产品中常见转基因成分(CaMV 35S启动子、NOS 终止子、 pat 基因和bar基因)的定性筛查(见附录A) 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件。 农业部1485号公告—4—2010 转基因植物及其产品成分检测 DNA 提取和纯化 农业部2031号公告— 19—2013 转基因植物及其产品成分检测 抽样 NY/T 672 转基因植物及其产品检测 通用要求 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 ZSSIIb 基因 zSSIIb gene 编码玉米淀粉合酶异构体 zSTSⅡ-2的基因，本文件中作为玉米内标准基因。 3.2 CaMV 35S 启动子 35S promoter from cauliflower mosaic virus 来自花椰菜花叶病毒(cauliflower mosaic virus,CaMV)的35S 启动子。 3.3 NOS 终止子 terminator of nopaline synthase gene 来自胭脂碱合成酶基因的终止子。 3.4 pat 基因 phosphinothricin acetyltransferase gene 来源于绿产色链霉菌(Streptomyces viridochromogenes),编码膦丝菌素乙酰转移酶(phosphinothri- cin acetyltransferase,PAT)。 3.5 bar基因 bialaphos resistance gene 来源于土壤吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus),编码膦丝菌素乙酰转移酶(phosphinothricin acetyltransferase,PAT)。 4 原理 依据目前转基因玉米转化体中的外源插入序列，设计特异性引物及探针，对试样进行PCR 扩增。依 据是否扩增获得预期的DNA 片段或典型扩增曲线，判断样品中是否含有相应的转基因成分。 5 试剂和材料 除非另有说明，仅使用分析纯试剂和重蒸馏水， 2 农业农村部公告第423号—9—2021 5.1 琼脂糖。 5.2 10g/L 溴化乙锭(EB) 溶液：称取1.0 g 溴化乙锭，溶解于100 mL 水中，避光保存。 警 溴化乙锭有致癌作用，配制和使用时应戴一次性手套操作并妥善处理废弃物。 注：根据需要可选择其他效果相当的核酸染料代替溴化乙锭作为核酸电泳的染色剂。 5.3 10 mol/L 氢氧化钠(NaOH) 溶液：在160mL 水中加入80.0 g 氢氧化钠，溶解后，冷却至室温，再加 水定容至200 mL。 5.4 500 mmol/L乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Naz) 溶液(pH 8.0):称取18.6g 乙二胺四乙酸二钠，加入 70mL 水中，缓慢滴加氢氧化钠溶液(见5.3)直至EDTA-Na? 完全溶解，用氢氧化钠溶液(见5.3)调 pH 至8.0,加水定容至100 mL。 在103.4 kPa(121℃) 条件下灭菌20 min。 5.5 1mo