农业农村部公告第423号-3-2021CN.docx

ICS 65.020.01 CCS B 04 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 农业农村部公告第423号一3—2021 转基因植物及其产品成分检测 抗虫棉花DAS-21①23-5 及其衍生品种 定性PCR 方法 Detection of genetically modified plants and derived products— Qualitative PCR method for insect-resistant cotton DAS-21 ①23-5 and its derivates 2021-05-07发布 2021-11-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 I 农业农村部公告第423号—3—2021 前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：农业农村部科技发展中心、中国农业科学院植物保护研究所。 本文件主要起草人：谢家建、王颢潜、陈秀萍、单露英、于惠林、英珍、韩兰芝、李云河。 农业农村部公告第423号 — 3-2021 转基因植物及其产品成分检测 抗虫棉花 DAS-21O23-5 及其衍生品种定性 PCR 方法 1 范围 本文件规定了转基因抗虫棉花 DAS-21O23-5 转化体特异性普通 PCR 和实时荧光PCR 两种检测 方法。 本文件适用于转基因抗虫棉花 DAS-21023-5 及其衍生品种，以及制品中 DAS-21O23-5 转化体成分 的定性PCR 检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅 该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 农业部1485号公告 — 4 — 2010 转基因植物及其产品成分检测 DNA 提取和纯化 农业部1943号公告 — 1 — 2013 转基因植物及其产品成分检测 棉花内标准基因定性PCR 方法 农业部2031号公告 — 19 — 2013 转基因植物及其产品成分检测 抽 样 NY/T 672 转基因植物及其产品检测 通用要求 3 术语和定义 农业部1943号公告 — 1 — 2013界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 抗虫棉花DAS-21O23-5 转化体特异性序列 event-specific sequence of DAS-21O23-5 抗虫棉花 DAS-21023-5 的外源插入片段3端与棉花基因组的连接区序列，包括转化载体 T-DNA 部 分序列及棉花基因组序列。 4 原理 根据抗虫棉花DAS-21023-5 转化体特异性序列设计引物及探针，对试样进行PCR 扩增。依据是否 扩增获得预期的 DNA 片段或典型扩增曲线，判断样品中是否含有抗虫棉花DAS-21023-5 转化体成分。 5 试剂和材料 除非另有说明，仅使用分析纯试剂和重蒸馏水。 5.1 琼脂糖。 5.2 10g/L 溴化乙锭(EB) 溶液：称取1.0g 溴化乙锭，溶解于100mL 水中，避光保存。 警告——溴化乙锭有致癌作用，配制和使用时应戴一次性手套操作并妥善处理废弃物。 注：根据需要可选择其他效果相当的核酸染料代替溴化乙锭作为核酸电泳的染色剂。 5.3 10 mol/L氢氧化钠(NaOH) 溶液：在160 mL 水中加入80 .0 g 氢氧化钠，溶解后，冷却至室温，再加 水定容至200 mL。 5.4 500 mmol/L乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na?) 溶 液(pH 8.0):称取18.6 g 乙二胺四乙酸二钠，加入 70mL 水中，缓慢滴加氢氧化钠溶液(见5.3)直至 EDTA-Na? 完全溶解，用氢氧化钠溶液(见5.3)调 pH 至8.0,加水定容至100 mL。 在103.4 kPa(121℃) 条件下灭菌20 min。 5.5 1mol/L 三羟甲基氨基甲烷盐酸(Tris-HCl) 溶 液(pH8.0): 称取121 . 1g 三羟甲基氨基甲烷溶解于 800mL 水中，用盐酸调 pH 至8 . 0,加水定容至1000 mL。 在103.4 kPa(121℃) 条件下灭菌20 min。 2 农业农村部公告第423号—3—2021 5.6 TE 缓冲液(pH8.0): 分别量取10mL 三羟甲基氨基甲烷盐酸溶液(见5.5)和2mL 乙