NY_T 3639-2020CN 中华猕猴桃品种鉴定SSR分子标记法.docx

ICS 65.020.01 B 05 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 NY/T 3639—2020 中华猕猴桃品种鉴定 SSR 分子标记法 Identification of Actinidia chinensis cultivars using SSR markers method 2020-07-27发布 2020-11-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 3639—2020 目 次 前言 Ⅱ 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 原 理 1 5 仪器设备及试剂 1 6 溶液配制 1 7 引物相关信息及使用 1 8 参照品种及其使用 1 9 操作程序 2 10 判定方法 4 附录A(规范性附录)主要仪器设备及试剂 5 附录B(规范性附录)溶液配制 7 附录C(规范性附录)核心引物名单及序列 9 附录D(资料性附录) 核心引物相关信息 10 附录E(资料性附录) 参照品种名单及来源 11 工 Ⅱ NY/T 3639—2020 前 言 本标准按照GB/T1.1—2009 给出的规则起草。 本标准由农业农村部种业管理司提出。 本标准由全国植物新品种测试标准化技术委员会(SAC/TC 277)归口。 本标准起草单位：中国农业科学院郑州果树研究所、湖北省农业科学院果树茶叶研究所、天津市林业 果树研究所、十堰市经济作物研究所。 本标准主要起草人：方金豹、钟云鹏、齐秀娟、孙雷明、张蕾、林苗苗、刘景超、陈锦永、朱先波、顾红。 1 NY/T 3639—2020 中华猕猴桃品种鉴定 SSR 分子标记法 1 范围 本标准规定了利用简单重复序列(Simple Scquence Repeats,SSR)分子标记进行中华猕猴桃[Actin- idia chinensis Planchon,包括中华猕猴桃原变种(Actinidia chinensis Planch. var. chinensis)和美味猕猴 桃变种(Actinidia chinensis Planch. var. deliciosa A.Chevalier)]雌性品种鉴定的术语和定义、原理、仪 器设备及试剂、溶液配制、引物相关信息及使用、参照品种及其使用、操作程序和判定方法。 本标准适用于中华猕猴桃雌性品种的 SSR 分子标记鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 NY/T 2351 植物新品种特异性、 一致性和稳定性测试指南 猕猴桃属 NY/T 2594 植物品种鉴定 DNA 分子标记法 总则 3 术语和定义 NY/T 2594 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 核心引物 core primers 品种鉴定中优先选用的一套 SSR 引物，具有多态性高、重复性好等综合特性。 3.2 待测样品 test sample 送检单位提供的待鉴定的中华猕猴桃种质、品系、品种。 4 原理 简单重复序列(SSR) 广泛分布于中华猕猴桃基因组中，不同品种间每个 SSR 位点重复单位的数量可 能不同。针对每个SSR 位点两侧序列高度保守的特点，设计一对特异引物，利用 PCR (聚合酶链式反应， Polymerase chain reaction)技术对重复序列进行扩增。在电泳过程中，由于SSR 位点重复单位的数量不 同，经过扩增产生不同长度的片段，在电场作用下得到分离，经硝酸银染色或者荧光染料标记加以区分。 因此，根据SSR 位点的多态性，利用 PCR 扩增和电泳技术可以鉴定中华猕猴桃品种。 5 仪器设备及试剂 见附录 A。 6 溶液配制 见附录 B。 7 引物相关信息及使用 引物名单及序列见附录C, 引物等位变异等相关信息参见附录D。 8 参照品种及其使用 参照品种的名称及来源参见附录 E。 在进行待测样品等位变异检测时，应同时包括相应参照品种的 2 NY/T 3639—2020 PCR 扩增产物的检测。 注1:同一名称不同来源的参照品种的某一位点上的等位变异可能不相同，在使用其他来源的参照品种时，应与原参照 品种核对，确认无误后使用。 注2:对于附录E 中未包括的等位变异，应按本标准方法，通过使用DNA 分析仪与参照品种同时进行检测确定其大小。 9 操作程序 9.1 样品制备 试验样品为中华猕猴桃的幼嫩叶片，每份样品中至少随机抽取3个单株，进行混样分析。当一致性结 果较差时，进行单独取样分析。 9.2 DNA 提取