化学发光原理和应用.pptxVIP

化学发光原理和应用第1页/共69页 临床检验常见类别血液/体液常规检测免疫生化微生物放射性免疫检测酶联免疫检测金标免疫检测化学发光检测直接化学发光酶促化学发光电化学发光临床检验定量半定量第2页/共69页 免疫定量检测原理 血液（尿液）中有很多含量非常低（pg/ml、ng/ml 、 mg/ml），但非常灵敏，其浓度变化能准确反映人体疾病的发生、发展状况。如： T3、T4、AFP、肌钙等等 【生化：检测含量比较高的物质】 准确、定量 【酶标法、金标法：定性、半定量】检测对象检测要求第3页/共69页 免疫标记技术发展历程放射免疫 优点：准确、定量，项目齐全缺点：放射性污染 试剂有效期短（一个月） 操作繁琐、时间2小时左右 第4页/共69页 磁酶免 半自动化学发光 时间分辨优点：没有放射性污染，试剂有效期长（6个月以上）缺点：操作繁琐，2小时有结果，准确性差免疫标记技术发展历程第5页/共69页 全自动化学发光优点： 没有放射性污染 试剂有效期长（6个月以上） 操作全自动 速度快，半小时出结果 结果最准确缺点： 试剂价格贵免疫标记技术发展历程？第6页/共69页 全自动化学发光主要品牌罗 氏雅 培西门子贝克曼新产业第7页/共69页 化学发光主要技术包被技术：板式化学发光 ： 固液相 5%参加反应(时间分辨) （定性 定量不准） 磁颗粒化学发光 ： 准均相 95%参加反应 （精确 定量）第8页/共69页 发光原理：直接化学发光 标记物在碱性（酸性）条件下，加强氧化剂，瞬间发光 厂家由10个点做成标准曲线，用户只要高低两点定标修正曲线即可，节省试剂，结果稳定、准确酶促化学发光 标记物在酶催化下，缓慢发光 由于酶不稳定，每次都必须用6-12个点做标准曲线，浪费试剂化学发光主要技术第9页/共69页 经过清洗和分离后，在反应杯中先后加入激发底物1和激发底物2，引发化学发光反应，产生光信号。 仪器测定后显示相对光强度(RLU)值，最后根据工作曲线计算待测物浓度。夹心法免疫定量检测原理第10页/共69页 免疫定量检测原理夹心法 样本,ABEI标记物,FITC标记物和磁珠加入到反应杯中，温浴15分钟*,形成“夹心三明治”免疫复合物，并被磁珠俘获。第11页/共69页 在夹心法中，待测物浓度和样本RLU值成正相关此时主曲线单调递增免疫定量检测原理第12页/共69页 免疫定量检测原理RLU0Con.50500ABCDEFGHIJ主曲线的绘制：十点定标第13页/共69页 竞争法磁珠样本，ABEI标记物,FITC标记物和磁珠加入到反应杯中，温浴15分钟*,ABEI标记抗原，和样本待测抗原竞争结合FITC标记的抗体，2种产物同时被磁珠俘获。免疫定量检测原理第14页/共69页 经过清洗和分离后，在反应杯中先后加入激发底 物1和激发底物2，引发化学发光反应，产生光信号。 仪器测定后显示相对光强度(RLU)值，最后根据工作曲线计算待测物浓度。竞争法免疫定量检测原理第15页/共69页 在竞争法中，待测物浓度和样本RLU值成负相关此时主曲线单调递减免疫定量检测原理第16页/共69页 *两点定标原理Cal1Cal2主曲线定标曲线C01C02Δ1%=Rf|C1-C01|Rf C1*100%线性补偿曲线免疫定量检测原理第17页/共69页 发光标志物 ABEI在酸碱溶液里都非常稳定独家专利 ABEI化学品名称: N-(4-氨基丁基)-N-乙烷基异鲁米诺 N-(4-Aminobutyl)-N-ethylisoluminol分子式: C14H20N4O2 分子量： 276.33第18页/共69页 + NaOH + H2O2 ABEI 激发底物1 激发底物2 发光 (持续测量3秒)发光信号产生及测量ABEI直接化学发光发光标志物 ABEIdelay 2.5s delay 0.1s第19页/共69页 发光标志物 ABEI第20页/共69页 纳米磁珠：由聚合物交联构成骨架，包裹纳米级铁氧化物形成的微米级的小球纳米级铁氧化物赋予磁性微球超