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目的基因的获取;;第3页/共65页;结构基因的组成;目的基因的获取方法;;;适合于从简单的基因组中分离目的基因,如质粒或病毒的大小只有几千碱基,大的也超不过几十万碱基,编码基因比较少,获得也比较简单.;;;;三、物理化学法;目的基因的获取方法;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;7. cDNA文库与基因组文库相比的优越性表现在;4、 cDNA克隆可用于在细菌中能进行表达的基因克隆，直接应用于基因工程操作。;8. cDNA文库与基因组文库相比的缺点;;目的基因的获取方法;第三节 PCR扩增获得目的基因;第43页/共65页;;;;;值得注意的是常规PCR，可以合成的DNA片段长度有限，一般在1KB以内，大于他扩增效果显著下降。;特殊类型的PCR;3、反向PCR;目的基因的获取方法;;;具体做法：将一个大的保护基团，如芳香磺酰氯（ArSO2Cl）或二环己基碳二亚胺（DCC）加到脱氧核苷酸的3`或5`羟基上。这样，具有5`-保护的单核苷酸，便能够通过它的5`-OP同另一个3`-保护的单核苷酸的3`-OH之间定向地形成一个二酯键，从而使它们缩合成两端都受保护的二核苷酸分子。;实验中使用的各种不同的保护基团，有些可以通过酸处理移去，有些可以通过碱处理移去。所以不论是5`-的保护基团还是3`-的保护基团，都可以通过酸或碱的脱保护作用而除掉。这样的一个带5`-保护的合成的二核苷酸分子，又能够同另一个带3`-保护的单核苷酸或二核苷酸进行第二次缩合反应，形成一个三核苷酸或四核苷酸分子。;第56页/共65页;;;;;;;;;感谢您的欣赏
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