豚鼠过敏试验与中性粒细胞吞噬功能实验小吞噬.pptxVIP

豚鼠过敏试验与中性粒细胞吞噬功能实验小吞噬;掌握豚鼠过敏实验的原理； ;二、原理;; Ⅰ型超敏反应又称为速发型超敏反应，是由特异性的IgE抗体介导的，其主要特征为： 出现快，消退也快； 出现功能紊乱性疾病，不出现严重组织细胞损伤； 有明显个体差异和遗传背景。;第6页/共44页;静息肥大细胞;荨麻疹; 先给豚鼠注射小量异种蛋白，经过一定的潜伏期，动物处于致敏状态。当第二次用较大剂量相同抗原注射豚鼠时，抗原激发豚鼠体内的肥大细胞或嗜碱性粒细胞，致使这些细胞释放多种生物活性介质，豚鼠迅速产生严重的过敏反应及至过敏性休克或死亡。; 1、豚鼠：体重200g左右的幼小豚鼠； 2、变应原：马血清、鸡蛋清； 3、其他：生理盐水、无菌注射器、针头、碘酒、酒精、棉球等。;四、实验步骤;2.致敏：按1：10分别稀释马血清，按照下表操作腹腔注射0.1ml。;第13页/共44页;3.发敏：按1：10分别稀释马血清，鸡蛋清，按照下表，心内注射2ml。;第15页/共44页; 豚鼠1在注射马血清1-5分钟会出现不安、抓鼻、喷嚏、呼吸困难、竖毛、大小便失禁、痉挛性跳跃，症状严重者在数分钟内死亡。 而豚鼠2、3无任何症状。 ;第17页/共44页;将死亡豚鼠解剖，可见肺脏极度水肿，胀满整个胸腔。;1、心脏注射时，首先要固定好动物，然后于心跳最明显之处进针，感觉有搏动、注射器内有回血时再注射过敏原； 2、由于动物个体反应性不同，有的反应较轻，可幸免死亡。如果再注射马血清也不出现反应，此称为脱敏状态。但脱敏状态是暂时的，大约2周后又处于致敏状态。 ;中性粒细胞吞噬功能实验(小吞噬）; 熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理和方法 通过本实验理解机体的非特异性免疫机制;吞噬作用（phagocytosis）：是指细胞从周围环境摄取固体颗粒（如：微生物或较大的细胞残片）的活动。 血液中的中性粒细胞是一种小吞噬细胞，通过趋化、调理、吞入和杀菌等步骤，能吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物，是机体非特异性免疫的重要组成部分。;吞噬细胞（phagocyte）：主要包括中性粒细胞（neutrophil）和单核吞噬细胞（mononuclear phagocyte）两类。 ;大吞噬细胞;大吞噬细胞;小吞噬细胞;吞噬过程示意图 ;中性粒细胞的吞噬作用;吞噬过程 ;1、无菌肉汤，白葡菌液，PBS缓冲液，瑞氏-姬姆萨染液。;1.诱导：实验前1小时给小白鼠腹腔注射(头低位、曲形进针)无菌淀粉肉汤2ml，诱导浆液渗出。 2.注射：给小白鼠腹腔内注射白葡菌液1ml，轻揉腹部，让小鼠活动。 3.取样：注射后30分钟处死小白鼠，抽取腹腔液涂片。 4.干燥：室温或者放温箱中完全干燥标本。;5.瑞氏-姬姆萨染液染色： 滴加3滴A液于标本上，以完全盖住标本为宜，染色40秒。 滴加8滴B液，用洗耳球吹出微风使液面产生涟漪，使两液充分混匀，染色5分钟。 水洗（勿先倒掉染液，应以流水冲去）。 吸水纸拍干水分，干燥。 6.油镜镜检;;小吞噬;涂片应薄厚均匀适中，避免过薄或过厚。 瑞氏染液染色时间不能过长以免染色过重。 ;附1：小白鼠的抓取和固定;;;2.腹腔注射;3.小白鼠的处死方法;;4：油镜使用镜油的原理;5.油镜的使用方法;感谢观看!