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基因探针的学习材料;基因探针;检测DNA的技术称为.Southern blot杂交. 检测RNA的技术称为. Northern blot杂交. 检测蛋白质的技术称为.Western blot杂交. 还有dot blot,原位杂交技术等. ;杂交类型;核酸分子杂交(固相杂交);探针与核酸杂交的方法;探针基因的分离制备;（a）;RNA印迹技术（Northern blotting） 1979年，J.C.Alwine等人发展而来，是将RNA分子从电泳凝胶转移到硝酸纤维素滤膜或其他化学修饰的活性滤纸上，进行核酸杂交的一种实验方法。由于这种方法与萨瑟恩DNA印迹杂交技术十分类似,所以叫做诺赛恩RNA印迹技术（Northern blotting）。 而将蛋白质从电泳凝胶中转移到硝酸纤维素滤膜上，然后同放射性同位素125I标记的特定蛋白质之抗体进行反应,这种技术叫做韦斯顿蛋白质杂交技术（Western blotting）。 ;斑点印迹杂交和狭线印迹杂交 斑点印迹杂交（dot blotting）和狭线印迹杂交（slot blotting ）是在Southern印迹杂交的基础上发展的量种类式的快速检测特定核酸（DNA和RNA）分子的核酸杂交技术。由于在实验的加样过程中使用了特殊设计的加样装置，使众多待测样品能够一次同步转移到杂交滤膜上，并有规律地排列成点阵或线阵。这两项技术更适应与核酸样品的定量检测。;检测重组体克隆的菌落杂交技术;原位杂交(in situ hybridization ISH);一、基因探针;2. 基因探针的要求;3. 核酸探针杂交所用的固相载体;核酸杂交常用几种膜的性能比较;硝酸纤维膜(NC膜);4. 基因探针的标记物;5. 探针标记方法;DNA的切口平移法;切口平移的反应体系;随机引物法;随机引物的获得：;单链DNA探针;将靶序列克隆于适当的M13噬菌体或噬菌粒载体中，分离出带有靶序列的单链DNA;RNA探针;多克隆位点;DNA的5’或3’末端标记;寡核苷酸标记;标记基因探针的纯化;1）探针浓度; 转印; 预杂交; 杂交液;; ;原位杂交技术的基本方法：;原位杂交固定;固定剂;在病理学活检取材时多用福尔马林固定和石蜡包埋。 其它固定剂如应用多聚甲醛蒸汽固定干燥后的冷冻切片也可获满意效果。各种固定剂均有各自的优缺点，如沉淀性(Precipitating)固定剂：酒精/醋酸混合液、Bouin’s液、Carnoy’s液等能为增加核酸探针的穿透??提供最佳条件,但它们不能最大限度地保存RNA,而且对组织结构有损伤。 戊二醛较好地保存RNA和组织形态结构,但由于和蛋白质产生广泛的交联,从而大大地影响了核酸探针的穿透性。 ;杂交;杂交后漂洗;显示;非特异性染色;常用的对照试验;通常用地高辛(Dig),生物素,荧光素,同位素,等标记探针; (一) 、地高辛(Dig)标记DNA探针在石蜡切片检测病毒DNA的方法。 (二) 、生物素标记DNA探针在石蜡切片上检测目的DNA的方法。 (三)、cRNA探针检测组织切片中的RNA原位杂交。 (四)、用寡核苷酸探针检测组织切片中的RNA原位杂交。 (五)、用cDNA探针检测体外培养细胞中的RNA原位杂交。 (六) 、 RNA原位杂交与免疫组化双重检测技术。 (七) 、多重RNA原位杂交技术。(双重原位杂交是在同一标本或同一细胞内同时检测两种或两种以上的靶核酸序列的技术。) (八) 、原位杂交的PCR增敏法。  ;;原位杂交技术应用;分子灯塔 是一个用荧光标记的核酸探针.也叫分子信标,它是近几年兴起的利用核酸杂交技术对核酸分子进行检测的新技术。 这一技术是由纽约市公共健康研究协会于1996年首次建立的。因其在与核酸分子互补结合之后荧光素便能开始发光,故称为“分子灯塔”。这一技术的建立为研究核酸分子的组成、含量及对ＰＣＲ过程中进行实时监控提供了快速、特异、方便的新方法。分子灯塔作为一种核酸探针,不但适用于体外核酸分析,而且适用于活体分析;不仅广泛应用于核酸分子的研究,还是一种极好的研究蛋白质等能与核酸发生相互作用的物质的工具。 ;灯塔是一个用荧光标记的,具有“发夹”样结构的单链寡聚核苷酸序列,一般含20～30个核苷酸,由两部分组成,即环状部分和茎部。如图1所示[1]:环状部分为单链核苷酸,是分子灯塔的基因识别部位,它能与靶基因一段ＤＮＡ或ＲＮＡ,在ＲＮＡ聚合酶的存在下特异的互补结合。茎部是一段由4～12对碱基(大多含有5对碱基)互补形成的发夹结构。在茎部的末端,即5’端和3’端通过连接臂分别与荧光素和淬灭物质结合。荧光素和淬灭物质可根据研究目的的不同自行设计。 ;分子灯塔在未与靶序列结合以前,以环茎结构的形式存在,其茎部的双链互补结