基因工程的主要操作技术及原理.pptVIP

氯化铯密度梯度离心法纯化质粒DNA 大肠杆菌染色体DNA构型：线性的或开环的DNA分子因其具有游离的末端而易于解旋，故可结合相当大量的EB分子浮力密度小。 质粒共价闭合环状的DNA(cccDNA)分子，由于没有游离的末端，只能发生有限的解旋反应， 便限制了EB分子的结合数量，浮力密度大。 当前第30页\共有81页\编于星期五\7点 RNA的提取 当前第31页\共有81页\编于星期五\7点 防止RNA降解，抑制RNAse活性 所有的组织中均存在RNA酶，人的皮肤、手指、试剂、容器等均可能被污染。 需戴手套操作并经常更换（使用一次性手套）。 所用的玻璃器皿需置于干燥烘箱中 200℃烘烤2小时以上。 材料如塑料容器等皆可用0.1%的焦碳酸二乙酯(DEPC)水溶液处理,高压灭菌。 DEPC:一种高活性的烷基化试剂。常用做核酸酶抑制剂(特别是用于灭活广泛存在的核糖核酸酶)、组氨酸残基修饰剂等。 当前第32页\共有81页\编于星期五\7点 DEPC使用方法 DEPC是RNA酶的化学修饰剂,它和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环反应而抑制酶活性。 DEPC与氨水溶液混合会产生致癌物,因而使用时需小心。 试剂也可用DEPC处理,加入DEPC至0.1%浓度高压灭菌以消除残存的DEPC,否则DEPC也能和腺嘌呤作用而破坏mRNA活性。 DEPC能与胺和巯基反应,因而含Tris和DTT的试剂