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实验过氧化氢酶活性测定第1页/共11页第2页/共11页实验10 过氧化氢酶活性测定 （高锰酸钾滴定法） 第3页/共11页一 实验目的掌握和学习测定过氧化氢酶活性的原理和方法；2 了解过氧化氢酶的作用。第4页/共11页二 实验原理 过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢既是氧化剂又是还原剂。可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。第5页/共11页 在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。即可求出消耗的H2O2的量。反应式 5H2O2+2KMnO4+4H2SO4 5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4第6页/共11页三 实验器材1 试剂10%H2SO4；0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；0.1mol/L KMnO4标准液：称取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000mL，再用0.1mol/L 草酸溶液标定；0.1mol/L H2O2：取30%H2O2 （17.6mol/L）溶液5.68mL，稀释至1000mL，用标准0.02mol/L KMnO4溶液（在酸性条件下）标定。第7页/共11页2 材料:小麦叶片3 主要设备：离心机，恒温箱，酸式滴定管第8页/共11页四 方法步骤1、 酶液提取 取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000转离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。 第9页/共11页2 、滴定：取50mL三角瓶3个（2个测定，另1个为对照），测定瓶中加入酶液2.5mL，对照加煮死酶液2.5mL，再加入0.1mol/L H2O2 2.5mL ，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO42.5mL。?3、用0.1mol/L KMnO4标准溶液滴定，至出现粉红色（在30s内不消失）为终点。 第10页/共11页5 实验结果酶活性：每g鲜重样品1min内分解H2O2的mg数表示式中：A－对照KMnO4滴定mL数； B－酶反应后KMnO4滴定mL数； VT－提取酶液总量（mL）； VS－反应时所用酶液量（mL）； W－样品鲜重（g）； T－反应时间（min）； 1.7－1mL0.1mol/L KMnO4相当于1.7mgH2O2。第11页/共11页感谢您的欣赏
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