转基因技术原理与方法.pptxVIP

转基因技术原理与方法;2023/4/2;2023/4/2;第4页/共57页;2023/4/2;2023/4/2;2023/4/2;2023/4/2;2023/4/2;2023/4/2;2023/4/2;2023/4/2;2023/4/2;2023/4/2;2023/4/2;2023/4/2;第17页/共57页;转基因熊猫狗;转基因技术;简介;转基因的方法和原理;基本步骤;1、目的基因制备和载体系统; 1.目的基因的分离;2.良好载体需要满足的条件;质粒载体;质粒载体pBR322;pUC19质粒;λ噬菌体;λ噬菌体载体;柯氏质粒 Cosmid;2、遗传转化的方法; 植物遗传转化的方法;农杆菌: used extensively for genetic engineering of plants. 包含Ti质粒 Tumor inducing plasmid (bacterial plasmid) T-DNA (Transferred-DNA), 可以转移进入植物基因组.;根癌农杆菌 (Agrobacterium tumefaciens),是一种革兰氏阴性土壤杆菌,它含有Ti质粒,能诱导被侵染的植物细胞形成肿瘤,即诱发冠瘿瘤.Ti质粒(包括Ri质粒)上有一段转移DNA,在农杆菌侵染宿主植物时,这段DNA可以转移进植物细胞,并稳定地保留在植物细胞染色体中,变为植物细胞新增加的一群基因,最终能通过有性世代遗传给子代 。;Ti Plasmid;农杆菌与植物细胞相互作用的机制 ;基因枪转化法由美国Cornell大学的Sanfor (1987)提出,它的主要原理是将包含目的基因的载体包被在微小的金属微粒(钨粒或金粒)表面,通过高压驱动力加速微粒穿透植物细胞壁,导入受体组织细胞内,然后通过组织培养再生出完整的植株.微粒上的外源DNA进入细胞后,整合到染色体上并得到表达,从而实现基因的转化.。;电击法的主要原理是将原生质体在溶液中与DNA混合,然后利用高压电脉冲作用,使原生质体膜的某些部位被击穿而产生可回复的小孔,外源DNA可通过小孔进入原生质体内,而且不影响经电击处理的原生质体再生植物的能力. ;花粉管通道法是利用开花植物授粉后形成的花粉管通道,直接将外源目的基因导入尚不具备正常细胞壁的卵、合子或早期胚胎细胞,实现目的基因转化. ;PEG介导基因转化的主要原理是聚乙二醇(PEG)、多聚-L-鸟核苷酸(pLO)、磷酸钙及高pH值条件下诱导原生质体摄取外源DNA分子.PEG可促使细胞膜与DNA间接触与粘连,并通过引起膜表面电荷的紊乱及干扰细胞间的识别,利于细胞膜间的融合以及外源DNA进入原生质体. ; 动物外源基因的导入方法 1）显微注射法 （microinjection） ; 2）逆转录病毒介导法;3）胚胎干细胞法;4）精子载体法 意大利Lavitrano等1989年首次报道利用精子作为载体获得了转基因小鼠。;5）细胞核移植法;6）生殖细胞转染法 ;基因转移的方法;3、转基因苗的筛选与鉴定;例 Gus检测;GFP（绿色荧光蛋白基因）;LUC (萤火虫荧光素酶基因);;表达荧光的转基因鱼;第53页/共57页;转基因植物的PCR检测;杂交鉴定;Thank you !;感谢观看!